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鸡马立克氏病(Marek’s disease,MD)是由鸡马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)引起的鸡的一种高度接触传播的淋巴组织增生性肿瘤疾病。该病在历史上曾对养禽业造成了沉重的打击,自上世纪70年代起利用弱毒疫苗对鸡实施免疫接种起,才得以被控制,但由于MDV的毒力在不断地增强,对现有的免疫策略提出了严竣的挑战。MDV为疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科双链DNA病毒,分3种血清型,只有血清1型致病。其中CVI988/Rispens是一个人工培育的MDV-1低毒力株,CVI988/Rispens株疫苗是目前全球用以控制MD使用最多且免疫效果最好的弱毒活疫苗。深入研究MDV基因结构功能及调控机制,是有效防控MD的前提。但MDV庞大的基因组,严格的细胞结合性的特点,传统的基因操作技术对其研究十分困难,利用细菌人工染色体技术构建MDV全长基因组的感染性克隆成为对MDV基因进行操作的一个有力工具。本研究首先利用自主构建的重组病毒转移载体pUA1B1-gpt-BAC和MDV CVI988 (Rispens)株感染细胞总基因组共转染鸡成纤维细胞(CEF),启动病毒感染后,在选择培养基的选择加压筛选条件下,经六轮筛选、富集并完全纯化了重组病毒;BAC重组病毒与亲代病毒体外生长的蚀斑形态和生长动力学曲线无明显差异,初步表明载体的插入没有改变病毒体外生长的生物学特性。适时提取重组病毒感染CEF细胞的总DNA,电转化导入大肠杆菌DH10B,挑取阳性克隆经鉴定获得了37个BAC分子克隆化病毒。选取10个BAC分子克隆化病毒经过初步PCR鉴定为全基因组BAC分子克隆化病毒。本研究成功构建了鸡马立克氏病病毒CVI988/Rispens株全基因组分子克隆化病毒,为建立鸡马立克氏病病毒CVI988/Rispens株的反向遗传操作技术平台奠定了基础。