【摘 要】
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紫杉烯合成酶是一种二萜环化酶,在红豆杉植物体内催化牦牛儿基牦牛儿基焦磷酸酯形成4(5),11(12)-紫杉烯,被认为是最新抗癌药物紫杉醇生物合成过程中的关键酶.该文构建了中国
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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紫杉烯合成酶是一种二萜环化酶,在红豆杉植物体内催化牦牛儿基牦牛儿基焦磷酸酯形成4(5),11(12)-紫杉烯,被认为是最新抗癌药物紫杉醇生物合成过程中的关键酶.该文构建了中国红豆杉(Taxus chinensis)愈伤组织的cDNA文库,利用紫杉烯合成酶cDNA保守区段的引物对中国红豆杉愈伤组织DNA进行PCR扩增,用扩增得到的700-800bp的片段作为探针,采用化学发光标记原位杂交方法杂交筛选出阳性cDNA克隆,将插入片段克隆到pBlusescript SK质粒载体中,并将其全长测序.结果表明:实验中得到的cDNA为2.9kb,其3端核苷酸顺序共2kb与太平洋红豆杉紫杉烯合成酶cDNA中合成酶编码区相似性高于92%,两者在紫杉烯合成酶cDNA的二萜环化酶同源区核苷酸顺序完全一致,说明该文获得的cDNA是紫杉烯合成酶cDNA,同时表明这一同源区可能编码紫杉烯合成酶的活性中心.实验中得到的cDNA5端核苷酸顺序与太平洋红豆杉紫杉烯合成酶质体转移肽编码区的核苷酸顺序则完全不同.这是首次从中国红豆杉中分离得到紫杉烯合成酶cDNA克隆,实验证明中国红豆杉紫杉烯合成酶与太平洋红豆杉紫杉烯合成酶的羧基端和保守区十分相似.
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