纤维蛋白胶(FG)粘合法联合应用神经生长因子(NGF)治疗周围神经损伤的实验性研究

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目的:周围神经损伤后修复治疗,是目前困扰临床工作的一个难题。周围神经损伤后的生长过程十分复杂,神经损伤后,修复的目的是恢复其连续性。研究表明应用纤维蛋白胶修复神经过程中,在神经对合端形成凝胶环,有“再生室”的作用,也使周围神经损伤后的修复治疗方法更多样化。周围神经损伤修复后如何促进神经的再生是周围神经外科的一大难题。以往多采用物理治疗、中医药治疗、维生素B12促进周围神经损伤后的再生,但效果均不明显。本实验运用纤维蛋白胶(FG)粘合雄性Wistar大鼠坐骨神经断端,联合局部及全身用应用神经生长因子(NGF)治疗周围神经损伤的实验性研究,观察神经断端在光镜、电镜,免疫组化及神经电生理检查中的变化。并与神经单纯缝合比较疗效。NGF是神经系统最重要的生物活性分子之一,现已证实NGF是参与损伤神经再生和功能修复的重要因素,兼有神经营养因子与促神经突起生长因子双重作用,其临床应用有广阔的前景。周围神经损伤的治疗和康复一直是困扰医学界多年的难题,一旦发生周围神经损伤,其感觉运动功能恢复均不慎理想。FG是以纤维蛋白原及凝血酶为主要原料的医用粘合胶,现在已广泛用于外科各领域,如止血、实质性脏器的粘合、吻合口瘘的防治、组织工程支架及缓释载体的运用等等。对于纤维蛋白胶的相关基础实验研究也随之深入,并取得了很多的成果。纤维蛋白胶(FG)联合神经生长因子(NGF)有更好的促进周围神经再生的作用。   方法:1、动物分组:健康清洁级雄性Wistar大鼠24只,体重250g~300g,随机分为四组,即Ⅰ组(FG+NGF):局部应用FG,局部及肌肉注射NGF:Ⅱ组(NGF):肌肉注射NGF;Ⅲ组(FG):仅局部应用FG;Ⅳ组(NS):肌肉注射生理盐水,每组6只。2、模型复制:采用左侧坐骨神经为修复模型进行实验。1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(40mg/kg)。取左侧股后部纵行切口,切开皮肤,分离肌肉,由股后外侧肌间隙显露左侧坐骨神经,在坐骨神经距梨状肌出口1.5cm处用双面刀片切断坐骨神经,在手术显微镜下以神经表面血管为解剖标志对位。FG组将纤维蛋白胶滴至吻合端,30秒左右纤维蛋白胶凝固,即刻见粘合对位较佳;FG+NGF组在此基础上应用神经生长因子30μg于神经断端,术后肌注神经生长因子(NGF)每日1次,剂量均为每次30μg,连用28~84d;缝合组采用11/0尼龙线外膜缝合4针。术后肢体不固定。术后8周取材,并送光镜、电镜,神经电生理测定。   结果:1、组织学观察,术后8周纵向切片观察到FG+NGF组轴突扭曲较轻,瘢痕形成较少;NS组轴突扭曲较明显,呈盘旋状,瘢痕形成较多。透射电镜观察,术后8周FG+NGF组和FG组再生神经中有髓神经纤维排列整齐,髓鞘结构基本正常,轴突内神经微丝和微管及线粒体结构重新出现;NS组再生神经中有髓神经纤维较疏散,髓鞘厚薄不一致,轴突内神经微丝、微管结构模糊,可见空泡样变性。2、坐骨神经电生理检查及其它指标检测结果可见,FG+NGF组与其余各组比较,运动神经潜伏期延迟比、吻合口神经纤维通过比、有髓纤维截面积恢复比差别具有显著性意义(P<0.05),表明FG+NGF组比其余各组有不同程度的改善。   结论:本实验的结果说明:纤维蛋白胶(FG)粘合法联合应神经生长因子(NGF)可以明显减轻胶原纤维增生,加速神经断端生长,为临床修复周围神经损伤提供一种简单,迅速,有效的外科修复方法。其具有的特点是未来医学发展的方向,值得进一步研究。
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