透明质酸钠凝胶中交联葡聚糖的定量分析

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医用交联透明质酸钠凝胶常用于组织器官缺损和外科整形手术的填充等。为提高交联透明质酸钠凝胶稳定性和药物缓释等性能,开始使用交联葡聚糖作为填充介质。针对医用产品,药典制定了严格的标准要求,包括性状、鉴别、含量测定等项目。但目前尚无关于交联葡聚糖定量方法的文献和报道。所以研究开发交联葡聚糖的定量分析方法,具有重要理论和现实意义。本文首先探索了高效液相色谱、分光光度、热重分析、热裂解-气相色谱/质谱联用技术用于测定交联葡聚糖含量的可行性。根据仪器技术原理、样品准备要求、交联葡聚糖特性和定量要求,最终采用在线高温热裂解技术处理样品,再与气相色谱和质谱联用,以仅出现在交联葡聚糖中的特征裂解产物——甘油为定量组分对交联葡聚糖进行定量分析,建立了一种快速定量测定医用交联透明质酸钠凝胶中交联葡聚糖的分析方法,并进行了方法学考察。同时,还探索研究了交联葡聚糖的热稳定性、热裂解机理及其动力学。研究结果表明:交联葡聚糖硫酸水解主产物不是葡萄糖,成分复杂,难以采用与葡聚糖类似的高效液相色谱法,或采用显色剂反应的分光光度法进行分析测定;热重分析法虽然不需预先水解样品,但精确度略显不足;采用在线高温热裂解-气相色谱/质联用技术进行定量分析,样品可直接进样而不需预先处理,裂解稳定性较好,且交联葡聚糖与特征裂解产物——甘油之间存在良好的定量线性关系。选择裂解温度为600℃,裂解时间30 s,交联葡聚糖在0.32 mg~1.14 mg范围内线性关系良好,相关系数大于0.9998,加标回收率在91.88%~102.94%之间。对凝胶产品进行多次测试,计算得相对偏差=0.40%,RSD=5.52%(n=5)。交联葡聚糖在氮气中的特征起始分解温度为311.1℃,特征终止分解温度为328.3℃,热分解活化能为70.84 kJ/mol。交联葡聚糖的热裂解初期可能产生侧基消去反应、逆羟醛缩合反应、转糖苷作用以及发生在交联基团醚键α位的断裂。
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