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脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)可致患者感觉、运动功能丧失,自主神经功能障碍。在自主神经功能障碍中,肠功能障碍严重影响患者的生活质量,被认为是需要最优先、迫切解决的问题之一。既往研究显示,脊髓损伤后肠功能障碍与神经递质-P物质的变化有关,但是否存在其受体的变化并不清楚。另外,Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal,ICC)作为胃肠道慢波的起搏细胞,与胃肠电活动传播、神经递质传递等密不可分,它是否参与脊髓损伤后肠功能障碍的发生尚未见报道。因此,通过动物实验来研究脊髓损伤后肠功能障碍中P物质及其受体NK1R以及ICC的变化十分必要。我们在成功建立脊髓损伤模型的基础上,观察大鼠脊髓损伤后脊髓及结肠组织的病理变化;检测脊髓损伤后结肠生物电活动以及ICC的变化;研究脊髓损伤后脊髓及结肠组织中P物质及其受体的变化,进一步探讨脊髓损伤后肠功能障碍的形成机制。方法:1.大鼠脊髓损伤模型的建立。采用改良Allen装置以10g·25cm强度打击大鼠T10硬脊膜,建立大鼠脊髓损伤模型。2.行为学检测。以正常组大鼠为参照,采用BBB评分观察大鼠行为学变化,通过比较筛选出造模后BBB评分为“0-1”的大鼠进行实验。3.一般观察。以假手术组大鼠为参照,肉眼观察脊髓损伤后结肠的变化。4.病理学观察。以正常组、假手术组大鼠为参照,对SCI后脊髓损伤组织行EC染色,对SCI后大鼠近端结肠组织行HE染色,观察其病理变化特点。5.结肠生物电活动检测。以正常组、假手术组大鼠为参照,利用生物电记录仪检测SCI后1周、2周、4周大鼠近端结肠生物电活动变化。6.ICC检测。以正常组、假手术组大鼠为参照,利用免疫荧光、Western Blot检测SCI后1周、2周、4周大鼠结肠组织中ICC的变化。7.P物质及其受体NK1R检测。以正常组、假手术组大鼠为参照,利用免疫荧光双标、Western Blot分别检测SCI后1周、2周、4周大鼠脊髓和结肠组织中P物质及其受体NK1R的变化。主要结果:1.行为学检测:BBB评分:脊髓损伤后大鼠BBB功能评分为0-1分,提示脊髓损伤后大鼠双下肢完全瘫痪。2.一般观察:脊髓损伤后结肠组织充血、水肿明显,肠腔内可见较多干结粪粒。3.病理学观察:(1)EC染色:正常组、假手术组中大鼠脊髓白质髓鞘分布均匀,排列紧密;损伤组大鼠脊髓损伤处白质脱髓鞘明显,局部空洞形成。(2)HE染色:正常组、假手术组大鼠近端结肠绒毛上皮细胞排列整齐;损伤组大鼠近端结肠绒毛上皮细胞倒伏、脱落,粘膜层及肌层的厚度增加。4.结肠生物电活动检测:正常组、假手术组大鼠近端结肠生物电活动较规律;损伤组近端结生物电紊乱,振幅变异较大,且波形较不稳定。5.ICC检测:脊髓打击损伤1周时结肠组织内Cajal间质细胞阳性细胞数目为57.38±4.69,较正常组、假手术组明显减少(P<0.01);损伤2周时结肠组织内Cajal间质细胞阳性细胞数目为32.26±3.62,与正常组和假手术相比,其阳性细胞数明显减少(P<0.01);损伤4周时结肠组织Cajal间质细胞阳性细胞数目为25.07±3.05,明显少于正常组、假手术组(P<0.01)。脊髓打击损伤后结肠组织中c-kit蛋白表达呈现逐渐降低的趋势,其中,损伤4周时c-kit蛋白表达为0.409±0.117,与正常组相比,其表达量明显减少(P<0.01)。6.P物质检测:打击损伤组1周时脊髓损伤上段前角P物质表达为0.158±0.060,与正常组、假手术组相比未见明显差别(P>0.05);2周时P物质在脊髓损伤上段前角表达为0.323±0.098,较正常组、假手术组明显增加(P<0.01);4周时P物质在脊髓损伤上段前角表达为0.199±0.048,与正常组、假手术组相比未见明显差别(P>0.05)。脊髓打击损伤1周时P物质在脊髓损伤下段前角表达为0.090±0.009,与正常组、假手术组相比有所减少(P<0.05);2周时P物质在脊髓损伤下段前角表达为0.280±0.027,明显高于正常组、假手术组(P<0.01);4周时脊髓损伤下段前角P物质表达为0.129±0.022,与正常组、假手术组相比未见明显差别(P>0.05)。脊髓打击损伤1周后结肠组织P物质为0.239±0.091,与正常组、假手术组相比,P物质含量减少(P<0.05);脊髓打击损伤2周时结肠组织P物质含量为0.233±0.056,较正常组、假手术组明显减少(P<0.01);脊髓打击损伤4周时结肠组织中P物质含量为为0.206±0.041,明显少于正常组、假手术组(P<0.01)。7.NK1R检测:大鼠脊髓损伤后,脊髓组织中NK1R表达随时相点变化呈现先减少后增加的趋势。其中,损伤1天时脊髓NK1R表达最低,为0.978±0.414;损伤28天时脊髓NK1R表达为1.771±0.685,与假手术组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。主要结论:1.大鼠脊髓损伤后结肠肠腔内可见较多干结粪粒;2.大鼠脊髓损伤后脊髓损伤处白质脱髓鞘明显,局部空洞形成;3.大鼠脊髓损伤后近端结肠绒毛上皮细胞倒伏、脱落,粘膜层及肌层的厚度增加;4.大鼠脊髓损伤后结肠生物电活动改变;5.大鼠脊髓损伤后结肠肌内ICC数目减少,c-kit蛋白表达降低;6.大鼠脊髓损伤后脊髓前角、结肠肌内P物质及其受体NK1R改变明显。