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目的：通过基因工程菌大量表达纯化两种可溶性肝细胞癌相关抗原SMP30、CNN2,并分别以这两种基因工程蛋白作为抗原检测肝细胞癌、肝炎肝硬化等肝病患者及正常人血清中相应抗体的表达情况,探讨血清中这两种抗体联合AFP检测原发性肝癌的辅助价值。方法：活化基因工程菌E.Coli.BL21后,涂布于LB- Kan+培养基上37℃培养过夜,挑取单菌落接种于LB- Kan+培养液中,37℃培养过夜,保存菌种,并按1：100接种于新的LB-Kan+培养基中大体积培养2.5小时,之后加入IPTG诱导剂,37℃诱导表达5小时。菌体经超声破菌离心后,分别取上清和沉淀进行SDS-PAGE凝胶电泳。取上清过Ni-NTA亲和层析柱,以不同浓度的咪唑洗脱液对蛋白质进行纯化洗脱,超滤管超滤浓缩洗脱液,纯化浓缩后的蛋白用SDS-PAGE方法进行分析鉴定。分别用重组表达的两种蛋白包被酶标板,间接ELISA方法检测原发性肝细胞癌患者(HCC)、肝炎肝硬化患者和正常人血清中相应抗体存在的情况,结合各项临床指标进行统计分析。结合数据对肝炎肝硬化组阳性样本和部分阴性样本进行电话随访,分析与肝癌预后的关系。结果：取加入IPTG诱导剂前后菌液,破碎离心,取上清和沉淀分别进行SDS-PAGE分析,发现在目的蛋白条带附近,诱导之前与诱导后存在较大差异,其中诱导后的菌液上清和沉淀在目的蛋白附近均出现大量条带,而诱导前的菌液中则很少。分析认为,经IPTG诱导后,基因工程菌E.Coli.BL21表达出大量目的蛋白,并且有一部分为可溶性蛋白。与之前课题组表达纯化的蛋白较为一致。取上清过柱纯化,经超滤管超滤后得到的浓缩蛋白经SDS-PAGE电泳分析,得到较为单一的目的蛋白条带,经ImageJ软件分析,SMP30蛋白纯度为94.13%,CNN2蛋白纯度为81.7%。分别以上述两种蛋白为抗原包被酶标板,间接ELISA分析得知,抗SMP30抗体对HCC组的阳性检出率为25.87%,对肝炎肝硬化组的阳性检出率为4.25%,正常人组则未检出阳性样本。抗CNN2抗体对HCC组的阳性检出率为21.3%,对肝炎肝硬化组的阳性检出率为9.9%。对正常人组的阳性检出率为1.2%。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析,抗SMP30抗体诊断HCC组,ROC曲线下面积为0.824,灵敏度25.87%,特异度97.45%。抗CNN2抗体诊断HCC组ROC曲线下面积为0.73,灵敏度为21.14%,特异度为94.30%。两种蛋白经pearson Chi-Square双侧检测法对HCC组患者血清抗体与临床各项指标如年龄、性别、病理分级、AFP值、肝硬化与否、HBVe抗原、HBVe抗体、DNA拷贝数、乙肝表面抗原、乙肝表面抗体、ALT和AST值、肿瘤大小等等关系进行卡方检验,结果显示,各组的P值均大于0.05,没有统计学意义,即还不能确定阳性血清与临床资料有关系。两种血清抗体联合AFP检测HCC血清,阳性检出率为73.98%,明显高于单一检测,经统计学分析P<0.05,差异有统计学意义。联合检测有助于提高原发性肝癌的诊断率,减少漏诊。通过对肝炎肝硬化组阳性样本和部分阴性样本进行电话随访,暂未发现肝癌发生。尚无法确定肝癌发生与这两种相关抗原之间的关系。结论：1.我们的研究显示HCC患者血清中抗SMP30/CNN2抗体阳性率明显要高于肝炎肝硬化病人和正常人,对HCC的检测具有辅助诊断价值。2.抗SMP30/CNN2抗体联合AFP共同检测HCC血清抗体阳性率高于单一检测阳性率,有助于提高原发性肝癌的诊断率,减少漏诊。3.电话随访结果显示暂不能确定SMP30与CNN2血清抗体阳性与肝癌预后复发之间的关系。