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迟钝爱德华氏菌是一种重要的鱼类致病菌,严重危害到世界各地水产养殖业的健康发展。本课题基于反向疫苗学的基本原理,利用多种生物信息学的方法分析了迟钝爱德华氏菌的全基因组序列,预测得到275个候选抗原蛋白,并对所得候选蛋白进行了规模化、高通量的重组表达及纯化,进而以模式生物斑马鱼为实验动物,评价各候选抗原蛋白针对迟钝爱德华氏菌的免疫保护作用。研究中共完成193个基因的克隆,实现123个基因的异源表达,并成功纯化候选抗原蛋白85个；斑马鱼免疫保护效果显示,16个抗原蛋白的相对免疫保护率大于50%,为未来进一步的疫苗开发奠定了良好基础。同时,针对免疫保护效果较好、抗原递呈途径有显著差异的抗原蛋白GAPDH和FlgD分别在一级动物模型斑马鱼(实验室条件)和二级动物模型大菱鲆(临床鱼种)上进行了联合免疫效果评价,结果表明,两个蛋白混合后接种免疫具有更好的免疫保护效果；采用RT-qPCR分析其免疫应答机理,结果表明两个抗原蛋白混合免疫后同时激发宿主体液免疫和细胞免疫,这为后续多个抗原蛋白的联合免疫研究提供了新思路。