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苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）是一种可以形成芽孢的革兰氏阳性菌，目前已成为产量最大、应用面积最广的微生物杀虫剂。随着Bt制剂的深入应用，出现了害虫抗性及杀虫图谱窄等问题，因此筛选新的Bt基因和发掘已知基因的新活性具有重要的现实意义。本研究从河北省五岳寨地区采集了756份土壤样品，采集对象为地表以下5公分的腐殖土，通过温度筛选法分离得到72株Bt菌株。光学显微镜下观测菌株的晶体形态发现伴孢晶体包括了圆形、菱形、椭圆形、方形、不规则形等多种形态，充分体现五岳寨地区苏云金芽孢杆菌资源丰富并具有良好的多态性。通过PCR-RFLP鉴定体系对分离得到的72株菌株进行鉴定，利用26对通用引物进行PCR扩增鉴定基因型。结果表明，从这些菌株中发现13种不同的基因型和9种基因组合，其中基因型包括cry1类，cry2类，cry3类，cry4类，cry6类，cry8类，cry9类，cry11类，cry18类，cry22类，cry26类，cry32类和cry1I类，其中所占比例最大的是含有cry8类基因的菌株，为38株，其次为含cry1类和cry2类基因型的菌株，分别为30株和14株，另有10株未鉴定出基因型，可能含有新基因，需要借助其他方法进一步确定。SDS-PAGE蛋白分析结果表明，大部分菌株均会表达130kDa、90kDa、60kDa大小的蛋白。其中含有cry1+cry2基因组合的菌株大多表达130kDa和60kDa大小的蛋白，仅包含cry1或cry2类基因的菌株大多只表达130kDa大小的蛋白，其晶体形态多为菱形；仅包含cry8类基因的菌株多数只表达130kDa大小的蛋白，其晶体形态多为圆形或椭圆形；同时含有cry3+cry8类基因组合的菌会表达130kDa大小的蛋白；含有cry22类基因的菌株表达约90kDa大小的蛋白，其晶体形态为圆形；而未鉴定出基因类型的菌株其蛋白大小表达多样。在对榆兰叶甲幼虫的生物活性测定中，菌株WYZ-54表现出了较强的活性，其4d的校正死亡率达到80%，但是只表现出cry1、cry2和cry1I三类基因型，并未出现对鞘翅目具有活性的cry3或cry8类基因，通过克隆得到1500bp左右的部分基因序列，通过NCBI Blast分析，与GenBank中已知的Bt基因序列进行比对，结果显示菌株WYZ-54克隆的部分基因序列与GenBank中的已知模式基因Cry1Ia-like protein (cry1Ia)gene（序列号：FJ617448.1）的相似性最高，为99%。FPT-25为实验室保留菌株，在对暗黑鳃金龟幼虫的生物活性测定中表现出较高活性，其14天校正死亡率达70%。经PCR鉴定但未能确定其基因型，通过SDS-PAGE蛋白电泳分析，发现其表达80kDa和50kDa两条条带的蛋白，而并未表达一般对鞘翅目昆虫具有活性的130kDa的蛋白。根据Beron的研究方法，使用3对引物分别进行PCR扩增，回收得到1900bp左右的基因片段，通过序列比对，未发现与GenBank中已知的Bt基因存在相似性，推测含有新型基因，有待进一步研究。对72株Bt菌株的生物活性测定选取小菜蛾、斜纹夜蛾、华北大黑鳃金龟和铜绿丽金龟幼虫四种供试昆虫。结果显示，对小菜蛾具有较高毒力的Bt菌株（4d校正死亡率≥90%）有11株，其中校正死亡率达到100%有9株；对斜纹夜蛾具有较高毒力的Bt菌株（4d校正死亡率≥90%）有13株，其中校正死亡率达到100%的有12株；有7株菌株对铜绿丽金龟幼虫具有较高杀虫活性（14d校正死亡率≥90%）；菌株WYZ-12、WYZ-16、WYZ-30、WYZ-52对华北大黑鳃金龟幼虫的活性较高，14d的校正死亡率分别为60%、80%、60%、80%，以实验室保存菌株HBF-18为对照菌株，通过LC50毒力测定，发现其中两株菌株对华北大黑鳃金龟的毒力效果略高于对照菌株，而另两株较低。