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青龙衣是胡桃科胡桃属植物胡桃楸(Juglansmandshurica Maxim)未成熟果实的干燥果皮,近年来作为一种抗癌药物,已经被广泛应用于临床,尤其在消化系统肿瘤治疗中应用较多。目前开发研制中的六类新药,包括青龙衣糖膏,复方青龙衣颗粒、青龙衣口服液等在提高肿瘤患者生存质量,延长生命,降低死亡率等方面取得较满意的疗效。目前对青龙衣的研究主要以粗提物的形式开展相关药理活性筛选,该形式存在成分体系复杂、杂质干扰严重等问题制约更深入开展抗肿瘤作用机制的研究。本研究结合以往文献报道对青龙衣氯仿层及乙酸乙酯层有效部位进行系统成分分离获得一系列单体成分,并重点对分离获得的萘醌类单体成分进行了体内外活性筛选和初步抗肿瘤作用机理研究。本实验首先用95%乙醇对青龙衣进行温浸提取,得到的乙醇浸膏依次用氯仿、乙酸乙酯萃取,萃取液再通过硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱等方法进行反复分离,最终通过其理化性质以及UV、MS、1H-NMR、13C-NMR等波谱学测试手段,确定了其中12个化合物的化学结构,其中6个萘醌类化合物分别为:胡桃醌(1)、黄杞醌(2)、3-甲氧基胡桃醌(3)、2-乙氧基胡桃醌(4)、3-乙氧基胡桃醌(5)、4,8-二羟基-1-四氢萘酮(6);1个蒽醌类化合物:1,8二羟基蒽醌(7);3个三萜类化合物:20(S)-原人参二醇-3-酮(8)、齐墩果酸(9)、熊果酸(10);2个黄酮类化合物:槲皮素(11)和山奈酚(12)。萘醌类化合物2、3、4、5为首次从青龙衣中分离得到。采用MTT法测定6个萘醌类化合物对人胃癌细胞株BGC-823、人肝癌细胞株HepG-2和人宫颈癌细胞株HeLa的细胞毒活性,并对6个萘醌类化合物中得率高、活性好的胡桃醌、黄杞醌、3-乙氧基胡桃醌化合物进行急性毒性实验,结果显示胡桃醌、黄杞醌、3-甲氧基胡桃醌、2-乙氧基胡桃醌、3-乙氧基胡桃醌对BGC-823细胞的增殖抑制作用最显著,其中又以胡桃醌的细胞毒作用最强,IC50值为1.17±0.3μmol/L,2-乙氧基胡桃醌次之,IC50值为12.71±1.65μmol/L;急性毒性实验得知胡桃醌对昆明鼠机体的损伤较大,毒性最强,LD50值为33.57mg/kg,黄杞醌和3-乙氧基胡桃醌毒性相比胡桃醌小,LD50值分别为195.20mg/kg和144.34mg/kg,进而得知三种化合物发挥药效的安全剂量范围。同时,本文为了探究萘醌类成分的体内抗肿瘤作用机制,建立了人胃癌BGC-823荷瘤裸鼠模型,测定胡桃醌、黄杞醌、3-乙氧基胡桃醌对荷瘤裸鼠的体重、抑瘤率、脾指数等指标的影响;并采用酶联免疫法检测荷瘤裸鼠外周血清中TNF-a、IL-2、IL-6的含量变化;免疫组化法分析荷瘤裸鼠瘤体细胞的HE染色以及Bax、Bcl-2、VEGF的蛋白表达情况。结果表明胡桃醌、黄杞醌、3-乙氧基胡桃醌均具有明显的体内抗肿瘤活性,其中以3-乙氧基胡桃醌的抑瘤效果最好,抑瘤率为71.28±3.12%;三种化合物不同程度的上调裸鼠外周血清中TNF-a、IL-2、IL-6的含量,其中胡桃醌组荷瘤裸鼠外周血中TNF-a、IL-2的表达含量最多,分别为400.25±22.05ng、1202.92±85.90pg,而黄杞醌组、3-乙氧基胡桃醌组又可抑制由于患病裸鼠外周血中IL-6的过度表达,进而增强裸鼠机体抗肿瘤的免疫能力,协调免疫调节因子之间的平衡;同时胡桃醌、黄杞醌、3-乙氧基胡桃醌抑制人胃癌BGC-823荷瘤裸鼠瘤体细胞的生长可能与上调Bax的蛋白和下调Bcl-2蛋白的表达有关;抑制肿瘤微血管生长,可能与下调VEGF的蛋白表达有关,进而促进瘤体细胞凋亡发挥抗肿瘤生长作用。大量文献证实,胡桃醌有很强的体外抗肿瘤作用,但由于机体毒性较大,因此无临床应用报道。本文通过对已获得的萘醌类成分进行药理活性比较,发现某些以胡桃醌为母核的衍生物,如3-乙氧基胡桃醌对机体毒性明显降低,体内活性依然较好。因此今后要对萘醌类成分还需深入挖掘,以阐明此类成分的结构与抗肿瘤作用之间的构效关系,为探寻青龙衣中发挥抗肿瘤作用的有效成分提供了进一步的物质基础研究。