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目的：
研究北京友谊医院住院病人标本中鲍曼不动杆菌(Ab)耐药表型、亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌(CRAb)的检出率、耐药表型、部分耐药基因型及其同源性，对多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAb)进行KB法药敏试验并探讨阿米卡星出现的双圈现象，结合临床病历资料，分析针对MDRAb感染患者选药治疗措施，为临床预防、治疗选药和流行病学调查提供依据。
材料与方法：
1、Ab的分离、鉴定
110株非重复Ab，主要分离于2008年2月—2008年8月期间住院病人痰、咽拭子、血液、尿液、分泌物、骨髓等。全部实验菌株鉴定经全自动微生物系统VITEK——2 compact完成。
2、药敏试验
使用全自动微生物系统VITEK——2 compact或依据2007年美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的纸片扩散法进行操作和结果判读。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853。
3、同源性分析
采用REP-PCR方法构建指纹图谱，对39株碳青酶烯类抗生素耐药Ab(CRAb)进行同源性检测，确定菌株的亲缘关系。REP-PCR引物5—ⅢGCGCCGICATCAGGC—3，5，—ACGTCTTATCAGGCCTAC—3。PCR模板的制备：提取基因组DNA，20ul反应体系。
4、亚胺培南耐药Ab部分耐药基因检测
提取基因组DNA作为PCR模板。IMP基因引物(方向5’—3’)上游CTA CCG CAG CAG AGT CTT TG，下游AAC CAG TTT TGC CTT ACC AT；VIM上游AGT GGT GAG TAT CCG ACA G，下游ATG AAA GTG CGT GGA GAC；OXA23上游GAT CGG ATT GGA GAA CCA GA，下游ATT TCT GAC CGC ATT TCCAT；OXA24上游GTA CTA ATC AAA GIT GTG AA，下游TTC CCC TAA CAT GAA TTT GT： OXA51上游TAA TGC TTT GAT CGG CCT TG，下游TGG ATTGCA CTT CAT CTT GC。
5、对阿米卡星呈双圈现象的Ab进行传代诱导实验，并通过琼脂稀释法检测其对阿米卡星的MIC。
6、回顾分析部分检出MDRAb患者相关临床资料。
结果：
1、Ab菌株的耐药谱
110株Ab中70％属于MDRAb。Ab对青霉素类耐药率很高，但联合β内酰胺酶抑制剂后耐药率均减低；Ab对头孢菌素类耐药严重，头孢哌酮/舒巴坦敏感率亦较低；喹诺酮类抗生素均表现出较高耐药率；对碳青酶烯类亚胺培南的敏感率仅为30％，且一旦对碳青霉烯类抗生素耐药，则对其他抗生素亦基本耐药；丁胺卡那霉素的敏感率竞高达96.36％，但K—B法提示大部分应报告为耐药。中心ICU分离出Ab耐药率明显高于急诊等其他科室。K—B法药敏试验结果提示全部菌株对米诺环素表现为敏感；阿米卡星+头孢吡肟、阿米卡星+亚胺培南、多粘菌素B+利福平对部分MDRAb有协同作用。
2、CRAb同源性分析结果
同源性分析将39株CRAb其分为A、B、C、D4类，其中部分菌株具有100％同源。
3、CRAb部分耐药基因检测
CRAb的OXA—23携带率高，而碳青酶烯类抗生素敏感Ab中未检出；凡Ab均有OXA—51检出；未检出OXA—24、VIM以及IMP基因。
4、K—B法之阿米卡星双圈现象及其MIC
K—B法药敏试验证实MDRAb菌株大部分对阿米卡星表现为双圈现象，经传代诱导双圈可消失。该类菌阿米卡星MIC值均大于等于4096mg/L。
5、检出MDRAb患者临床资料
MDRAb主要分离自重症监护病房，感染者往往有长期应用抗菌药物、机械性通气、静脉插管、应用激素或免疫抑制剂等高危因素，100％患者有高血压、冠心病、肺心病等基础疾病中的一种或多种：住院时间较长，尤其是入住ICU时间较长患者鲍曼不动杆菌检出率高；60％以上患者同时感染其他细菌，以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等常见；检出MDRAb患者大都接受联合用药。
结论：
1、Ab是医院感染的潜在危险因素，Ab中MDRAb分离率高，ICU等高危病区的高危病人易感染，耐药谱广、耐药率高。
2、亚胺培南对Ab的敏感率低，而一旦Ab对碳青霉烯类抗生素耐药，则对其他抗生素亦基本耐药。Ab亚胺培南耐药与OXA—23基因密切相关。
3、部分MDRAb菌株有较高的同源性，REP-PCR方法简便，快速，花费低，可用于鲍曼不动杆菌同源性分析。
4、K—B药敏法结果较仪器法准确，对于MDRAb菌株，阿米卡星K—B法出现双圈现象，应报告耐药；米诺环素、阿米卡星+头孢吡肟、阿米卡星+亚胺培南、多粘菌素B+利福平等可考虑应用于临床。