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目的:牙周病一直以来被认为是一种成人口腔疾病,然而,近年来牙周病的发病率在儿童、青少年时期呈不断增长的趋势。菌斑生物膜是牙周病发病的始发因子,其中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)在牙周炎的发病过程中占据重要角色,P.gingivalis及其代谢产物可破坏牙周支持组织。赤藓糖醇(erythritol),是一种安全、无毒副作用、热量值低、无致龋性的食品添加剂,作为新型的甜味调节剂被广泛应用于食品、保健品等领域中。目前,学者们主要集中于赤藓糖醇防龋特性的研究,并发现其具有抑制致龋菌的生长繁殖及降低其产酸能力的作用。本实验以P.gingivalis作为实验对象,研究赤藓糖醇对P.gingivalis生长及黏附的影响,并进一步研究及探讨赤藓糖醇对其产生的胰酶样蛋白酶(trypsin-like protease,TLP)活性的影响作用,为临床上应用赤藓糖醇防治牙周病提供新的方向。方法:本实验以标准菌株P.gingivalis ATCC33277作为研究对象,配制牛心脑浸液培养基(BHI培养基),向培养液中加入赤藓糖醇以配制成2%、6%、10%、15%、20%质量浓度的溶液,设不加赤藓糖醇的BHI培养基为对照组。分别加入P.gingivalis菌悬液,在37℃恒温厌氧条件下培养,以4小时的时间间隔测量培养液的菌密度值(OD值),绘制其生长变化曲线,并用稀释涂板计数法观察各组菌落的数量及颜色变化。实验以正畸拔除牙的牙骨质表面作为P.gingivalis黏附载体,使用扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscope,SEM)和激光共聚焦扫描显微镜(Confocal Laser Scanning Microscop,CLSM)观察赤藓糖醇对P.gingivalis在牙骨质表面的黏附情况的影响。在上述配制的溶液中加入P.gingivalis菌悬液,厌氧条件下培养48h,收集培养细菌的上清液和菌细胞的破碎液,对赖氨酸蛋白酶(Rgp)行粗提取,测定TLP的活性及计算底物降解程度下Rgp活性百分比。结果:本实验结果显示赤藓糖醇可抑制P.gingivalis的生长及黏附作用,且赤藓糖醇的浓度越高其抑制效果越明显,组间两两比较差异具有统计学意义(P<0.05);质量浓度为10%的赤藓糖醇即可良好的抑制生物膜的形成。赤藓糖醇能够延长P.gingivalis在血平板中聚集血红素形成特征性黑色菌落的时间。P.gingivalis产生的TLP既可存在于菌细胞膜的表面,也可释放到培养液中呈游离的状态,且膜表面TLP的活性较游离状态的强。赤藓糖醇对TLP的活性具有抑制作用,且呈浓度依赖特性,赤藓糖醇浓度越高,其酶的活性越低,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:通过本实验可以得出,新型甜味剂赤藓糖醇对P.gingivalis的生长具有抑制作用,并可降低其在牙骨质表面的黏附作用,对P.gingivalis产生的TLP活性的抑制效果随赤藓糖醇的升高而降低。