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肌球蛋白(Myosin)是肌原纤维粗丝的重要组成部分,广泛存在于机体的各个组织器官中。本试验中我们探究在拟穴青蟹在感染白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)或溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)后,在青蟹的先天免疫过程中Myosin-9基因所起到的作用。运用cDNA末端快速扩增技术(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE),成功获得Myosin-9基因的序列,该序列长为2735 bp,其中开放阅读框(ORF)长为2145 bp,编码715个氨基酸。经过氨基酸序列比对和进化树分析,结果显示该基因与凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)亲缘关系较近。检测Myosin-9基因在各个组织中的表达量,结果显示Myosin-9基因在肌肉的表达量最高,在心脏、血淋巴、性腺中次之,鳃、肝胰腺等组织内表达量较低。通过构建Myosin-9基因的dsRNA表达载体,利用dsRNA抑制Myosin-9基因的表达,拟穴青蟹的多个已知免疫相关基因的表达受到影响,其中C-type-lectin的表达量显著提高,Toll-like-receptor(TLR)及Crustin antimicrobial peptide(CAP)的表达量有一定的提高,STAT、JAK及Prophenoloxidase的表达量则显著下调。通过检测拟穴青蟹免疫指标发现,血细胞总数(THC)显著下降,酚氧化酶(PO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性降低,说明Myosin基因在青蟹的免疫系统中起着重要的作用。在感染白斑综合征病毒后,Myosin-9基因的表达量显著升高。在敲低Myosin-9基因后,血细胞对病毒粒子的吞噬率显著降低,病毒的拷贝数显著升高,青蟹的死亡率相比于未敲低时显著提高。由此可见,在敲低Myosin-9基因后,青蟹对白斑综合征病毒的抵抗力显著降低,说明Myosin-9可能参与青蟹抵御白斑综合征病毒的免疫反应过程。本文揭示了Myosin-9在拟穴青蟹抵御病毒感染的免疫反应中的作用,为探究甲壳动物先天性免疫抗病的分子机制提供了理论依据。在感染溶藻弧菌后,Myosin-9基因的表达量显著上调。在敲低Myosin-9基因后,血细胞对弧菌的吞噬率显著降低,血细胞的凋亡率显著提升,青蟹的死亡率显著升高,由此可见,在敲低Myosin-9基因后,青蟹对弧菌的免疫强度显著降低,说明Myosin-9可能参与青蟹抗弧菌的免疫反应。本文发现了Myosin-9在拟穴青蟹抵御弧菌感染的免疫反应中的作用,为揭示甲壳动物先天性免疫抗病的分子机制提供了理论依据。本研究显示了Myosin-9对青蟹抗病免疫的重要性,可以此为靶标,筛选能提高青蟹抗病免疫力的绿色免疫增强剂,为防治青蟹养殖中的病害提供有力的支持。