【摘 要】
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福建省稻瘟病菌菌株81278ZB15含Avr-Pi1、Avr-Pi2、Avr-Pi4a、Avr-Pi4b无毒基因簇,通过图位克隆技术定位在BAC克隆子805L15中,但其序列拼接不完整,仍有2个gap没有填补。本研
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福建省稻瘟病菌菌株81278ZB15含Avr-Pi1、Avr-Pi2、Avr-Pi4a、Avr-Pi4b无毒基因簇,通过图位克隆技术定位在BAC克隆子805L15中,但其序列拼接不完整,仍有2个gap没有填补。本研究利用生物信息学软件分析805L15序列,共预测到48个基因,其中包含8个胞外分泌蛋白和1个GPI信号锚定蛋白。利用酵母同源重组技术构建了第1、8、16、23、32、37、43号基因的过量表达载体,并转入Guy11菌株的原生质体获得基因OE转化子;同时利用同源基因替换策略构建了第23号基因的敲除突变体。将这些稻瘟病菌突变体分别喷雾接种C101LAC Pi-1(t)、C101A51 Pi-2(t)、C104PKT Pi-3(t)、C101PKT Pi-4a、C105TTP-4L-23 Pi-4b、CO39近等基因系水稻品,结果表明,其毒性与野生型菌株Guy11一致,说明这些基因中并不含有无毒基因Avr-Pi1、Avr-Pi2、Avr-Pi4a。但是,对突变体其他表型的分析结果显示,8号基因OE转化子产孢量上升,43号基因OE转化子对洋葱表皮侵染能力下降而对水稻的致病能力不变,说明这两个基因分别与稻瘟病菌的产孢和侵染有关。鉴于上述结果,若要获得预期中的无毒基因,应重新拼接BAC克隆子805L15,得到其完整序列,并对81278ZB15中所含无毒基因进行重新预测。或者对无毒基因进行重新定位,获得新的BAC克隆子并进行基因预测,进行进一步研究。
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