论文部分内容阅读
目的： 探讨电针调节Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路抑制软骨细胞凋亡的作用机制。 方法： 1.基于国内外的相关文献，以电针干预骨性关节炎的文献为研究对象，采用综合-分析-归纳的方法，探讨电针调节骨性关节炎软骨细胞功能改变相关信号通路及调控因子的可能作用机制。 2.清洁级4周龄SD大鼠，采用机械-Ⅱ型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞，并用TNF-α诱导建立软骨细胞的凋亡模型，倒置相差显微镜观察软骨细胞的形态结构，Ⅱ型胶原免疫组化鉴定软骨细胞，MTT检测软骨细胞的活性，DAPI检测软骨细胞的凋亡情况。 3.SD鼠30只，分为空白组、对照组、实验组，电针干预后，制备电针后血清。培养第2代软骨细胞，采用10％空白组血清培养;模型组，采用TNF-α20μg/L+10％空白组血清;对照组，采用TNF-α20μg/L+10％对照组血清;实验组，采用TNF-α20μg/L+10％电针后血清，干预48 h后，DAPI染色检测软骨细胞凋亡率，MTT检测各组软骨细胞的活性，Western Blot检测Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2蛋白表达的变化。 结果： 1.电针通过调节软骨细胞的增殖、分化及凋亡相关信号通路的关键调控因子表达，参与软骨细胞功能的调控，从而延缓软骨退变。电针治疗骨性关节炎具有多途径、多靶点的优势。 2.体外培养软骨细胞，Ⅱ型胶原免疫组化染色可见胞浆呈棕黄色，为阳性细胞。各组干预48 h，软骨细胞凋亡率，TNF-α10μg/L、20μg/L、30μg/L明显高于0μg/L（P＜0.01），TNF-α40μg/L明显高于10μg/L(P＜0.01);软骨细胞活性，TNF-α10μg/L、20μg/L、40μg/L明显低于0μg/L(P＜0.01)，TNF-α20μg/L明显低于10μg/L（P＜0.05），TNF-α40μg/L明显低于10μg/L(P＜0.01)、20μg/L(P＜0.05)。 3.电针后血清，能明显改善TNF-α诱导软骨细胞的状态，抑制软骨细胞凋亡，提高软骨细胞活性，与模型组相比(P＜0.05)。电针后血清，具有不同程度的抑制TNF-α诱导软骨细胞中Ras、Raf、MEK1/2、ERK1/2蛋白的表达，与模型组相比(P＜0.01，P＜0.05)。 结论： 1.TNF-α20μg/L能成功建立软骨细胞的凋亡模型。 2.电针后血清通过调节Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2信号通路，抑制TNF-α诱导软骨细胞凋亡。