银鲫与斑马鱼Ly-6/uPAR相关蛋白的分子克隆及其特征分析

• 作 者: 王伟
• 机 构: 中国科学院大学
• 出 处: 中国科学院大学
• 发表日期: 2015年期
• 关键词: 银鲫 斑马鱼 Ly-6基因 精子发生 分子克隆

Ly-6/uPAR基因超家族(Ly-6 SF)成员广泛地存在于后生动物中，该家族的成员都含有一个至数个长度约为70-100个氨基酸构成的Ly/uPAR(LU)结构域，同时在氨基酸C末端含有保守的“CCXXXXCN”氨基酸基序。可根据家族成员蛋白中是否含有GPI(Glycosyl phosphatidyl inositol)锚信号序列将该基因家族成员分为锚定膜蛋白和分泌型蛋白两个大类。　　我们从银鲫（Carassius auratus gibelio）“中科三号”中鉴定到一个该家族新成员，cDNA全长为570bp，其中开放阅读框长度为300bp，编码99个氨基酸，生物软件预测该蛋白含有一个LU结构域，不含GPI锚信号序列，N端含有信号肽，表明其可能为Ly-6基因超家族中分泌型蛋白。组织表达分析显示，该基因只在银鲫精巢中特异表达，且又是Ly-6基因超家族中一员，为此我们将其命名为银鲫精巢特异的Ly-6/uPAR相关蛋白(Carassius auratus gibelio testis-specific Ly-6/uPAR related protein，简称CagTslurp)。精巢组织切片原位杂交结果显示，CagTslurp在银鲫精巢的精原细胞，初级精母细胞以及次级精母细胞中表达，精子细胞中存在少量的表达。这种精巢特异的表达模式，暗示CagTslurp在银鲫精子发生中可能发挥了作用。　　同时，我们又从模式生物斑马鱼(Denio rerio)中克隆鉴定到一个该家族成员，cDNA全长为623bp，其中开放阅读框长度为300bp，编码99个氨基酸。生物软件预测该蛋白含有一个LU结构域，不含GPI锚信号序列，N端含有信号肽，表明其很可能为Ly-6基因超家族中分泌型蛋白。斑马鱼精巢中特异表达，为此我们命名该基因为斑马鱼精巢特异的Ly-6/uPAR相关蛋白(Denio rerio testis-specific Ly-6/uPAR related protein，简称DrTslurp)。胚胎表达分析，显示DrTslurp在早期不表达。直到受精后24天的斑马鱼精巢中才开始检测到该基因的微量表达。斑马鱼原位杂交结果显示，DrTslurp也主要在斑马鱼精巢的精原细胞，初级精母细胞以及次级精母细胞中大量表达，精子细胞中存在少量的表达，而在体细胞中不表达。这种精巢特异表达模式，暗示着DrTslurp可能在斑马鱼精巢发育过程中发挥作用。