【摘 要】
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Adenoregulin(ADR)是从非洲树蛙Phyllomedusa bicolor皮肤中分离得到的一种由33个氨基酸组成的抗菌多肽.天然抗菌肽ADR的C末端为酰胺化的缬氨酸,除具有广谱抗菌活性外,对丝状
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Adenoregulin(ADR)是从非洲树蛙Phyllomedusa bicolor皮肤中分离得到的一种由33个氨基酸组成的抗菌多肽.天然抗菌肽ADR的C末端为酰胺化的缬氨酸,除具有广谱抗菌活性外,对丝状真菌具有独特高效的致死作用.化学合成抗菌肽ADR基因并利用PCR技术获得C-末端带有谷氨酰胺残基的突变体Cadr基因,将其分别克隆到表达载体pET32a(+)中,在E. coli BL2l(DE3)中进行融合表达.通过对抗菌肽ADR的表达优化及发酵生产,摇瓶中目标蛋白的表达量可达25-30％,3.7L发酵罐中菌体密度最终达到62 g/L(DCW),ADR融合蛋白表达量达5％左右.抗菌肽ADR及其突变体Cadr的融合蛋白经金属亲和层析分离后,分别用CNBr和肠激酶切割.除采用常规方法RP-HPLC分离多肽外,通过多种色谱分离纯化的摸索,最终建立了两种有潜在应用价值的多肽分离方法,其一阴离子交换层析与高压凝胶色谱结合,其二金属鳌和层析与高压凝胶色谱结合.纯化得到的C-端未酰胺化的抗菌肽ADR及C-端具有酰胺基团的突变体Cadr均显示出与文献报道相似的抗菌活性.经比较ADR和Cadr对多种微生物的抗菌活性,我们发现突变体Cadr C-末端酰胺基团的存在提高了其对真菌Tritirachium album和Saccharomyces cerevisiae的抑菌活性.
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