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猫泛白细胞减少症在世界范围内普遍存在,对宠物、养殖业及野生动物存在重大威胁。此病具有极高的感染率和致死率,且预后效果较差,接种疫苗被认为是最有效的防控手段。在疫苗制备过程中,抗原的制备是重要的环节,直接影响着疫苗的质量。目前大部分生物制品多采用转瓶培养或微载体培养,产出的病毒效价较低,而且由于血清的使用使得产品成本居高不下,批次间差异大,质量不稳定,且容易产生污染。从行业发展和产品竞争力考虑,应用悬浮培养细胞系,通过对生物反应器培养参数的控制,开展大规模动物病毒培养,有助于降本增效,提高产品品质和企业核心竞争力。本研究从用于生产猫泛白细胞减少症疫苗的猫肾细胞（F81）系出发,采用逐步降血清法、有限稀释法和悬浮驯化等方法得到单克隆低血清悬浮F81细胞系。进而优化血清浓度、培养基、细胞传代密度、摇床转速和冻存条件等培养参数。结果表明,驯化得到的低血清单克隆F81-18细胞株,低血清悬浮细胞培养血清浓度为2%,最佳传代密度为1×10~6cells/m L,细胞培养72 h后达到最大密度5.83×10~6 cells/m L,此时细胞活率为92%。无血清单克隆株F81-09最佳培养条件为,使用无血清培养基M-03-01、细胞传代密度1.0×10~6cells/mL、摇床转速120 r/min、培养温度37℃。此培养条件下无血清单克隆株F81-09,细胞培养96 h后达到最大生长密度8.63×10~6 cells/m L,细胞活率为90%。细胞最佳冻存条件为冻存密度为1.5×10~7 cells/m L,冻存液组成成分为无血清培养基、胎牛血清和DMSO,相应比例为6:3:1。对猫泛白细胞减少症病毒悬浮培养关键技术参数开展优化分析,筛选细胞接种密度、MOI、培养温度等参数,进而根据病毒滴度变化确定培养条件及收毒时间。利用控制变量法筛选出适合无血清单克隆株F81-09培养猫泛白细胞减少症病毒的培养参数。结果表明,猫泛白细胞减少症病毒最佳培养工艺为,采用同步接毒法,接毒时细胞密度为1.0×10~6cells/m L,MOI为3.5×10-3,摇床转速为120 r/min、在37℃条件下培养。接毒后培养72h,培养得到的猫泛白细胞减少症病毒病毒滴度最大可达到107.6TCID50/0.1mL,制备抗原生产疫苗,动物免疫后28 d,HI≥1∶1024。在15 L生物反应器中对培养参数p H、溶氧浓度、搅拌速度、温度进行筛选。结果表明生物反应器培养无血清单克隆株F81-09最佳培养条件为p H=7.1、溶氧浓度为50%、搅拌速度为80 rpm、温度为37℃。综上所述,本研究建立的无血清悬浮培养F81细胞可在生物反应器中稳定生长,可快速规模化繁殖病毒,且采用无血清培养基,可显著降低生产成本,提高成本效益。本文报道贴壁F81细胞成功适应无血清悬浮培养,达到了降本增效的目的,彰显了其在相关生物制品生产中的巨大潜力。利用优化后的病毒悬浮培养工艺,将所得病毒液制备疫苗对家猫进行免疫,初步评价,结果显示疫苗的免疫原性及安全性良好。为下一步生物反应器规模化生产猫泛白细胞减少症疫苗提供了基础数据,为其他以F81细胞作为细胞基质的生物制品研发提供参考和借鉴。