柴胡黄芩配伍应用对小鼠急性癫痫模型的影响

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目的与意义:癫痫是一类由多种原因所导致的脑部神经元的高度同步化异常放电而引起的以短暂性中枢神经系统功能失常为表现特征的临床综合征。根据病因的不同,癫痫一般分为两大类:既原发性癫痫和继发性癫痫。癫痫最为突出的临床特点是:反复发作,每次发作的不可预知以及需要长期的药物治疗。癫痫是神经系统最常见的疾病之一,是目前国内外神经科仅次于脑血管病及痴呆的第三大常见疾病。据流行病学资料统计,全世界约有5000万人口受到这种疾病的影响,近年我国的流行病学研究表明,有约900万癫痫患者,各地癫痫患病率在3.6‰—7.0‰不等。在我国广大农村地区,癫痫的患病率约为4.7‰-8.5‰,与全世界总体患病率基本相等,其中,约70%—-80%癫痫患者末接受治疗或治疗不规范,死亡率约为7.9/10万。由此可见,我国的癫痫患病率接近于发达国家,但死亡率却远高于世界水平,针对这一社会现象必须给予足够的重视。一直以来,癫痫患者同正常人群相较,都被认为会有更大的形成认知及行为障碍的概率。虽然存在明显的个体差异,但每个癫痫患者仍旧都会有认知能力受损害的风险。在癫痫发作频率高的患者中,认知功能和行为能力的损伤就会不断积累,从而使其语言能力、学习记忆力、注意力、定向力、行为以及情绪等均产生了不同程度的变化。目前,国内外治疗癫痫的标准是应用抗癫痫药物,而应用抗癫痫药物需要达到的目标即是消除癫痫发作,但是对引起癫痫的病理改变却无影响,且也不能阻断癫痫的进程。尽管目前抗癫痫药物的研究取得了很多进展,各种不同的新型抗癫痫药物不断问世,可是仍然有约1/3的癫痫病患者对药物的治疗不敏感。并且长期的癫痫发作和不间断的服用药物不但给患者家庭及社会带来相当大的经济负担。几乎所有的抗癫痫药物都有不止一种副作用,且差不多全部抗癫痫药物都有损害认知功能的可能性。同时又由于手术适应症的局限性、手术对颅脑功能的损害及昂贵的治疗费用等一系列相关因素,大大限制了外科手术治疗的应用。癫痫属中医“痫病”范畴,是一种发作性神志异常的疾病。因气机逆乱,元神失控而致精神恍惚,甚则突然仆倒,昏不知人等,移时苏醒后如常人的-类病症。中医中癫痫的病因病机与“痰”密不可分,亦与“肝”息息相关。既往研究表明,中医治疗癫痫有着悠久的历史,并且对现代医学及后人有着深远的影响。众多经方中的方剂对现代研究仍具有重要的指导意义,与此同时中医治疗癫痫也在与时俱进的发展。并且中药相对于西药而言,有毒副作用小及价格低廉等优势。癫痫“从肝论治”历史绵长,当代癫痫“从肝论治”多沿用《伤寒论》诸柴胡方加减。最大电休克模型(MES)、戊四氮(PTZ)惊厥模型、士的宁(STR)惊厥模型及匹罗卡品(PLCP)惊厥模型是应用最多的癫痫发作模型。可以抑制以上四种动物模型惊厥发作的药物,可能对控制临床癫痫的发作有效。本课题组前期研究表明:柴胡皂苷a在戊四氮、匹罗卡品、最大电休克所致动物癫痫中,有抗惊厥作用。另有研究显示:黄芩在匹罗卡品所致癫痫模型有抗惊厥及神经保护作用。药对是方剂中最基本的组成形式,在中医源远流长的发展长河中,有着悠久的历史,经方中众多经典药对沿用至今。现代对于中药药对的临床研究、理论研究、实验研究均有不同程度的进步和发展。药对经过配伍后,并不是做了一个简单的成分之间的加法,通常随之发生的是繁复的化学及物理变化,其中的化学成分就随之产生了变化。同时亦有研究表明,药对配伍可提高药物溶解度、提高药物靶向性、有药动学行为改变。张仲景以柴胡黄芩药对为基本组成,治疗黄疸、肝郁气滞所致的痞积肿块等多种病证,疗效显著。《本草纲目》:“柴胡行手足少阳,以黄芩为佐。”《本草述钩元》云柴胡“宣畅血脉,佐以黄芩为妙”。本课题组提倡癫痫“从肝论治”,自拟中药复方柴胡疏肝汤,在临床上取得了满意的治疗效果。柴胡为方中君药,臣以黄芩共奏和解少阳,疏理肝胆之功,又可疏畅气机与养肝柔肝相结合。故本研究建立了最大电休克、戊四氮、士的宁、匹罗卡品四个小鼠急性癫痫模型,拟进一步探讨柴胡黄芩配伍应用的抗癫痫作用。方法与内容:1最大电休克癫痫小鼠造模及处理使用YSD-4G药理生理实验多用仪筛选符合要求的小鼠,齿状夹以生理盐水浸湿后,夹住小鼠两耳尖部,进行交流电刺激,主要刺激参数为100V,2Hz(预实验结果),单次刺激方式,以后肢强直性伸直为惊厥指标,筛选符合条件的小鼠60只,随机分为6组,每组均为灌胃给药,灌胃前空腹8小时,A组(模型组)予等体积生理盐水,B组按柴胡黄芩5:2给药,其中柴胡浓度为0.3g/m1,C组按柴胡黄芩1:1给药,其中柴胡浓度为0.21g/ml,D组(柴胡组)、E组(黄芩组)浓度均为0.42g/m1,F组(地西泮组)浓度为0.4g/m1。末次给药1h后再行上述电刺激,记录惊厥数和强直持续的时间,计算惊厥率。2戊四氮急性癫痫小鼠造模及处理选取SPF级昆明小鼠60只,分组及给药方法同MES癫痫小鼠,在末次给药1h后,各组予戊四氮85mg/kg腹腔注射,立即观察小鼠的痫性发作30min,小鼠痫性发作分级采用Racine标准。记录小鼠痫性发作的潜伏期,包括阵发性痉挛潜伏期(即从注射戊四氮开始至相当于1-3级发作的时间)、强直性惊厥潜伏期(即从注射戊四氮开始至相当于5级发作的时间)、死亡潜伏期。3士的宁急性惊厥小鼠造模及处理选取SPF级昆明小鼠60只,分组及给药方法同MES癫痫小鼠,在末次给药1h后,各组予士的宁2mg/kg腹腔注射,立即观察小鼠的痫性发作15min,记录小鼠发生发作性阵挛潜伏期、死亡潜伏期。4匹罗卡品急性惊厥小鼠造模及处理选取SPF级昆明小鼠60只,分组及给药方法同MES癫痫小鼠,在末次给药1h后,各组予匹罗卡品400mg/kg腹腔注射,立即观察小鼠的痫性发作30min,记录小鼠发生发作性阵挛潜伏期及死亡潜伏期。5统计学方法数据用SPSS13.0软件进行统计学分析,计量资料用x±s表示,各组比较采用重复测量的方差分析,组间比较采用Tukey法;强直性惊厥发作率的比较用R×C表资料的卡方检验;P<0.05表示差异有统计学意义,P<0.01表示差异有显著统计学意义。结果:1柴胡黄芩配伍应用对最大电休克模型的影响各组之间的惊厥率差异有统计学意义(χ2=59.000,P<0.001),B、C、D、F组均能降低小鼠惊厥率,其中以B、F组降低明显。2柴胡黄芩配伍应用对戊四氮急性致痫小鼠发作性阵挛潜伏期、发作性强直潜伏期及死亡潜伏期的影响B、C、D、E、F组均能延长小鼠发作性阵挛潜伏期、发作性强直潜伏期及死亡潜伏期,与A组相比,C、D、E组无显著差异,B、F组有显著差异。3柴胡黄芩配伍应用对士的宁急性致痫小鼠发作性阵挛潜伏期及死亡潜伏期的影响B、C、D、E、F组均能延长小鼠发作性阵挛潜伏期,但与A组相比较均无统计学意义。B、C、D、E、F组均能延长小鼠死亡潜伏期,与A组相比,C、D、E组无统计学意义,B、F组有统计学意义(P<0.01),且B组同C、D、E组比有统计学意义(P<0.01)。4柴胡黄芩配伍应用对匹罗卡品急性致痫小鼠发作性阵挛潜伏期及死亡潜伏期的影响B、C、D、E、F组均能延长小鼠发作性阵挛潜伏期及死亡潜伏期,但与A组相比,除F组外均无统计学意义(P<0.01)。结论:柴胡黄芩配伍应用在小鼠最大电休克模型、戊四氮惊厥模型、士的宁惊厥模型及匹罗卡品惊厥模型中有明显抗惊厥、抗癫痫的作用,其中以柴胡黄芩5:2组效果显著。
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