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目的广藿香[Pogostemon cablin(Blanco)Benth]具芳香化湿、和胃止呕、祛暑解表的功效,是广东道地药材,著名的“十大南药”之一,目前国内外对广藿香的需求量极大。而由青枯菌(Ralstonia solanacearum)侵染引起的青枯病是广藿香种植过程中危害最为严重的系统性病害,严重威胁广藿香产业的生存与发展。因此,寻找新的安全有效的青枯病防治方法对于推广广藿香的种植、解决广藿香资源紧缺、发展广藿香产业具有重要的意义。植物内生真菌蕴含的活性物质资源十分丰富,已成筛选新化合物和新药的重要资源库,此外内生真菌与宿主植物在漫长的进化过程中已建立密切的联系,并能通过多种机制提高植物的抗病害能力,因而其在植物病害生物防治中也显示出良好的应用前景。目前对广藿香内生真菌的生物多样性缺乏全面的认识,关于其在广藿香青枯病防治中的潜在作用也尚未涉及。本论文旨在系统分析广藿香内生真菌的类群结构及多样性,并从中筛选出对广藿香青枯病具有生防潜力的活性菌株,为全面挖掘广藿香内生真菌的药用资源以及构建“内生真菌-广藿香”青枯病生防系统提供前期基础。方法1.传统培养法分析广藿香可培养内生真菌的多样性采用组织块分离法从广藿香健康植株的根、茎、叶中分离内生真菌,结合形态学和基于r DNA-ITS序列分析鉴定方法分析广藿香不同部位可培养内生真菌的类群结构及多样性。2.高通量测序方法全面分析广藿香内生真菌的多样性分别提取广藿香根、茎、叶样品的总DNA,用ITS5-1737F,ITS2-2043R引物对扩增真菌ITS区序列,Illumina Miseq高通量测序后分析比较广藿香不同部位内生真菌的类群分布和多样性。3.筛选对广藿香青枯病具有生防潜力的内生真菌通过双层平板拮抗试验分析广藿香内生真菌对青枯菌的体外拮抗活性;进一步通过盆栽试验分析验证活性菌株对广藿香青枯病的生防效果。结果1.从广藿香中共分离获得313株内生真菌,隶属于30个属,其中链格孢属(占28.75%)、拟茎点霉属(占23.00%)和炭疽菌属(11.82%)为优势类群,此外还分离到炭皮菌属、弯孢聚壳属、Gibellulopsis、新萨托菌属、葡萄座腔菌属、篮状菌属等较为少见的类群。茎、叶内生真菌的定殖率和分离率明显高于根,而根部多样性指数为2.643,要高于茎(2.002)和叶(1.974)。2.经过高通量测序后,广藿香3个部位共获得41188条有效序列,1305个OTUs分类,检测到子囊菌门和担子菌门2个门类,其中根的优势菌属为阿太菌属(11.13%)和漆斑菌属(10.19%),茎的优势菌属为曲霉属(5.58%),叶的优势菌属为曲霉属(0.64%)。广藿香茎部内生真菌的物种丰度和总多样性菌最高,根部次之,叶部最低。3.从分离到的内生真菌中筛选到16株对青枯菌有抑制活性的菌株,其中菌株GHXR07、GHXR27、GHXR29的体外抑菌效果较为显著,分别被鉴定为Talaromyces sp.、Myrothecium roridum和Talaromyces wortmannii;盆栽试验显示菌株GHXR07和GHXR29对广藿香青枯病相对防效分别为57.47%和69.36%。结论广藿香内生真菌具有丰富的物种多样性且其类群分布具有一定的组织特异性,其中部分菌株对青枯菌具有明显的体外拮抗活性,菌株GHXR07和GHXR29在盆栽实验中也显示出较好的青枯病防治效果,因此“内生真菌-广藿香”生防体系有望为广藿香青枯病的防治提供新方法。