线艺春兰再生体系的优化及组织结构解剖学的研究

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线艺兰是指兰科(Orchidaceae),兰属(Cymbidium)中的春兰(Cym.goer ingii(Rchb.f.)),建兰(Cym.emsifolium(L.)SW.),寒兰(Cym.Kanran Ma kino),墨兰(Cym.Sinense(Andr.Wild),蕙兰(Cym.faberi Rolfe)五种国兰线艺品种的总称。线艺兰花是因受到外界环境因素(如光照、雷击)的刺激,导致其遗传基因产生变异,叶片上出现黄、白色线条或斑纹等艺象的变异品种。线艺兰因叶片色彩亮丽,比一般兰花更具观赏价值,较受市场欢迎。但沿用传统的分株繁殖法,线艺兰繁殖系数极低,且由于其生态环境及养护条件的多变,线艺不能稳定的遗传下去,致使大量兰花珍品丧失。中国兰的组织培养已有一定进展,但有关线艺兰的组培研究尚未见报道。本文以线艺春兰‘绿云’的类原球茎为材料,分析建立了线艺春兰的高效再生体系,研究了其根状茎增殖与分化的起源。此外通过对兰花叶片的细胞超微结构的观察初步探讨了其叶片线艺产生原因。为线艺兰珍稀品种的保存及大规模工厂化生产提供理论依据。主要研究结果如下: (一)线艺春兰再生体系的优化 1.细胞分裂素BA、KT对根状茎的增殖有明显的促进作用;但KT浓度超过1.0mg·L-1后根状茎易玻璃化;0-3.0mg·L-1范围内生长素浓度越高越利于根状茎的形成,IBA促进根状茎的生长较NAA效果好。 2.基本培养基B5上的根状茎增殖较快,但培养50d后根状茎呈深绿色,部分开始褐化。1/2 MS固体培养基上的根状茎培养50d后直径较大,生长粗壮,颜色嫩绿,生长状况明显优于B5。因此B5培养基有利于根状茎短期的快速增殖,长期继代培养及保存宜选用1/2 MS固体培养基。研究表明1/2 MS与B5的转换培养在实际生产中比任何一种培养基单独培养更有利于根状茎的增殖。 此外,在MS的基础上微量元素的改变(硫酸锌8.6→15,硫酸铁27.8→20,EDTA二钠37.3→26.83,硫酸锰 22.3→12;单位:mg·L-1)更利于根状茎不定芽的分化。 3.BA 1.0mg·L-1+IBA 1.0mg·L-1是根状茎分化的最佳激素组合,芽分化率达到36.9%。
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