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机体的免疫系统功能状态同恶性肿瘤的发生发展密切相关。2002年Schreiber和Dunn在肿瘤免疫监视理论的基础上提出了肿瘤免疫编辑学说(cancer immunoediting)，认为免疫系统除了可以识别并清除肿瘤细胞，还具有免疫重塑功能，即对肿瘤细胞进行免疫选择，使免疫原性弱的肿瘤细胞进入免疫逃逸阶段，最终实现肿瘤进展。调节性T细胞(Treg)是免疫抑制中的重要一环，可以诱导肿瘤细胞通过免疫逃逸逃避效应细胞的识别和杀伤，促进肿瘤的发生发展。IL-35是2007年由Collison等和Niedbala等两个研究小组近乎同时发现的新型细胞因子，由IL-12的α亚基IL-12p35和IL-27的β亚基EBI3以异二聚体形式组成。IL-35是主要来源于调节性T细胞(Treg)的抑制性细胞因子，它不仅可以直接促进Treg分化、增殖和发挥最大免疫调节作用，还可以诱导产生新型iTR35细胞，从而级联放大机体的免疫抑制调控网络，是促进肿瘤免疫逃逸的重要因素。新近的研究证明，除了调节性T细胞外，调节性B细胞、部分肿瘤细胞均可表达IL-35，提示IL-35同肿瘤的发生、发展关系密切。在胰腺癌、直肠癌等肿瘤的研究中，可检测到IL-35的表达，并且IL-35的高表达同不良的临床病理因素相关。 第一部分 IL-35在乳腺癌浸润淋巴细胞和血浆中的表达及其临床意义 目的： 明确IL-35在乳腺癌患者中的表达情况，分析IL-35高表达与各临床病理因素之间的相关性，评估IL-35表达与患者预后转归的关联及能否作为乳腺癌新的生物标记物。 方法： 入组2008年01月至2010年05月行手术切除的、具有完整随访资料的女性乳腺癌患者110例，应用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中IL-35表达情况，探讨IL-35表达同乳腺癌TNM分期、ER、PR、HER-2表达及无进展生存期(PFS)、总生存期(OS)的关系。 入组2014年03月至2014年12月确诊的乳腺癌患者60例及健康对照30例，应用ELISA方法检测乳腺癌患者血浆中IL-35表达情况，探讨IL-35表达同乳腺癌TNM分期、ER、PR、HER-2、p53、EGFR、Ki67及分级的关系。 结果： 在乳腺癌组织浸润淋巴细胞中发现IL-35表达，110例乳腺浸润性导管癌患者中，IL-35高表达者19例，占17.3％，低表达者48例，占43.6％，不表达者43例，占39.1％，IL-35在肿瘤浸润淋巴细胞中的表达水平在年龄大于50岁、术后病理分期Ⅲ期、肿块大于2cm及ER阴性患者中显著升高(p＜0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示，肿瘤浸润淋巴细胞高表达IL-35的肿瘤患者组PFS和OS较低表达组显著缩短(p＜0.05)。 乳腺癌患者血浆中IL-35水平高于健康对照组，但差别无统计学意义（0.24±0.11 ng/ml vs0.23±0.10ng/ml，P=0.544）。但在乳腺癌患者中，Ⅲ期患者血浆IL-35表达水平显著高于Ⅰ和Ⅱ期的患者(0.29±0.13ng/ml VS0.22±0.09ng/ml，P=0.024)，腋窝淋巴结阳性患者的血浆IL-35表达水平显著高于阴性患者（0.28±0.13 ng/ml VS0.20±0.05ng/ml，P=0.004），但患者血浆IL-35表达水平与ER、PR、HER-2、p53、EGFR、Ki67表达及分级无明显相关性(p＞0.05)。 结论乳腺癌组织肿瘤浸润淋巴细胞中表达IL-35，高表达IL-35同多个预后不良因素密切相关，血浆中IL-35表达同临床分期和淋巴结转移密切相关。IL-35表达可以作为乳腺癌的不良预后因子。 第二部分 IL-35对乳腺肿瘤细胞生物学功能的影响及机制 目的： 探讨IL-35对乳腺肿瘤细胞增殖、细胞周期、凋亡的影响及其分子机制。 方法： 将外源性IL-35加入人乳腺癌细胞系MCF-7进行培养，应用MTT法检测增殖，流式细胞术检测细胞周期，比较实验组和对照组在增殖、凋亡及细胞周期中的差异。应用逆转录-PCR(RT-PCR)方法检测实验组和对照组促增殖相关分子(cyclin B、cyclin D、cyclin E、cdk2、cdk4)、抑制增殖相关分子(p15、p18、p21、p27、p53)、促进凋亡相关分子(Fas、FasL、TRAIL、Bax)、抑制凋亡相关分子(FLIP、Bcl-2、survivin)的表达水平，比较两组表达差异。从转录水平探讨IL-35对乳腺癌细胞增殖和凋亡相关分子的影响。 结果： 实验组增殖率较对照组显著提高，呈时间和浓度依赖性，提示IL-35在体外有促进乳腺癌细胞增殖的作用。与对照组相比，各实验组S期细胞的比例升高，浓度为0、2、10、50ng/ml组的S期细胞比例分别为:27.11％，29.17％，32.76％，34.80％，提示随着IL-35浓度升高，乳腺癌细胞增殖能力增强。 与对照组相比，IL-35处理组的细胞增殖相关分子cyclin E、cdk2水平上调，抑制增殖相关分子p15水平下调，两组差别有统计学意义(p＜0.05)。IL-35，处理组促进凋亡相关分子Fas、TRAIL水平下调(p＜0.05)。其他增殖及凋亡相关分子(cyclin B、cyclin D、cdk4、p18、p21、p27、p53、FasL、Bax、FLIP、Bcl-2、survivin)水平变化实验组和对照组无显著差异(p＞0.05)。 结论： IL-35可以通过调控促增殖相关分子cyclin E、cdk2上调、抑制增殖相关分子p15下调、促进凋亡相关分子Fas、TRAIL下调，促进乳腺肿瘤细胞增殖，抑制肿瘤凋亡而促进肿瘤的免疫逃逸。IL-35可作为乳腺肿瘤治疗潜在的靶点。