论文部分内容阅读
自首例艾滋病(Acquired Immune Deficiency Syndrom，AIDS)报道以来，艾滋病疫苗的研制工作一直在持续，但至今仍没有艾滋病疫苗问世。本研究小组用多种艾滋病疫苗进行序贯联合免疫取得了一定的效果。为了更合理地应用序贯联合免疫策略，有必要深入了解每种疫苗单独以及与其他疫苗联合应用的特点。腺病毒载体和腺相关病毒载体是在疫苗和基因治疗领域应用较广的两种载体，安全性也已得到验证，所以我们选择这两种病毒载体疫苗作为候选疫苗。本研究旨在对前期工作中观察到的腺相关病毒疫苗诱导的细胞和体液免疫反应分离的现象进行深入研究，同时研究这种现象能否在其他基因中再现以及腺病毒和腺相关病毒两种病毒载体携带不同的基因进行单独及联合免疫所诱发的免疫反应的差异，为疫苗和基因治疗的研究提供新的思路。 本文将携带HIV-lgag基因的rAd5及rAAV2/1疫苗免疫BALB/c小鼠后，用ELISA方法检测血清中Gag特异性及载体特异性的IgG抗体的滴度，用ELISPOT方法检测细胞免疫反应。结果显示，rAd5-gag可诱导较强的Gag特异性细胞免疫反应，同时也可产生载体特异性细胞免疫反应，Gag特异性细胞反应远远高于载体特异性反应。rAAV2/1-gag诱导的细胞免疫反应不管是载体特异性还是外源基因特异性的反应水平都很低。rAd5-gag疫苗诱导的载体特异性和外源基因特异性IgG抗体水平相当。rAAV2/1-gag疫苗诱导的外源基因特异性IgG抗体水平要远高于载体特异性IgG抗体水平。 将携带荧光素酶报告基因的rAd5及rAAV2/1疫苗通过肌肉注射免疫小鼠后，在不同的时间点用活体成像方法检测荧光素酶报告基因在体内的表达情况。结果显示，rAd5疫苗携带的报告基因的表达达峰时间快但是下降也很快，而rAAV2/1疫苗在肌肉注射后外源基因的表达达峰时间晚于rAd5疫苗，但是表达高峰一直持续。两种疫苗同时应用，报告基因的表达情况与两种疫苗单独应用时的趋势基本一致。rAAV2/1载体对于自身载体疫苗的再次应用有明显的抑制作用，而rAd5载体对自身载体的再次应用抑制作用较弱。rAd5载体的初次应用对于随后应用的rAAV2/1载体所携带的基因表达没有抑制作用。而rAAV2/1载体的初次应用对于随后应用的tad5载体所携带的基因表达有一定的抑制作用，但不是完全抑制。 将携带HIV-1gp160/gp145基因的rAd5及rAAV2/1疫苗单独或与携带HIV-1gag基因的rAd5及rAAV2/1疫苗联合免疫BALB/c小鼠，结果显示，rAAV2/1-gp145单独免疫后产生的Cp120特异性结合抗体峰值要高于rAd5-gp160单独免疫。当两种载体中gp160/gp145基因分别与gag基因联合应用时诱导的Gp120特异性抗体水平都高于gp160/gp145基因单独应用。这种增强作用在rAAV2/1载体中尤为明显。对Env特异性细胞免疫反应的检测结果表明，rAd5疫苗单独应用产生的细胞免疫反应水平要高于rAAV2/1疫苗，与前期研究结果一致。但是两种载体中gp160/gp145基因与gag基因联合对Env特异性细胞免疫反应都没有增强作用。Gp160诱导的Gp41特异性结合抗体水平高于Crp145。 综上所述，rAAV2/1可在体内长期表达，显著抑制同种载体的再次应用；rAd5仅在体内存在较短时间。两种载体携带不同基因的免疫反应规律一致，rAAV2/1诱导抗原特异性体液免疫反应强、细胞免疫反应弱，rAd5诱导细胞及体液免疫反应都较强。两种载体中gp160/gp145分别与gag联合时诱导的Gp120特异性抗体都高于gp160/gp145单独应用。说明疫苗载体和外源基因都是疫苗免疫原性的重要影响因素。对上述两种载体的深入了解为我们下一步合理应用这两种载体提供了实验依据。