【摘 要】
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通过Kan抗性筛选,得到了转化蛹虫草(Cordyceps militaris)Mn-sod基因的烟草(Nicotianatabacum cv. Yunyan85)植株,通过对后代植株的分子检测,筛选得到了纯合系。以单拷贝纯合
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通过Kan抗性筛选,得到了转化蛹虫草(Cordyceps militaris)Mn-sod基因的烟草(Nicotianatabacum cv. Yunyan85)植株,通过对后代植株的分子检测,筛选得到了纯合系。以单拷贝纯合株系14-18-1为材料,接种提纯的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV),以研究Mn-SOD在病毒与转基因烟草亲和性互作过程中的作用。试验结果表明,表达外源Mn-SOD的转基因烟草普遍表现出比野生型植株更易感病的特征,接种植株的病毒含量明显高于非转基因对照,通过对转基因烟草接种病毒后体内Mn-SOD和丙二醛(MDA)含量的分析,我们推测,在病毒侵染植株过程中,非转基因型植株通过调控降低Mn-SOD的表达量,维持较高的活性氧水平,在一定程度上起到抵御病毒进一步侵害的作用。而转基因烟草由于外源Mn-SOD的超量表达,降低了植物在抗病过程中的活性氧水平,一定程度上促进了病毒的侵染。 将蛹虫草(Cordyceps militaris)Mn-SOD的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行IPTG诱导表达,并优化了摇瓶培养的最适条件。在此基础上,建立了简便高效的纯化程序,通过超声波破碎、亲和层析、分子筛层析获得了Mn-SOD蛋白,蛋白纯度超过了98%,回收率达到了65%以上。同时还对纯化Mn-SOD蛋白的热稳定性进行了研究,为该蛋白的进一步开发与利用打下了基础。
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