论文部分内容阅读
对虾白斑综合症病毒(WSSV)是危害养殖虾产业的主要病原。WSSV极早期基因在病毒感染后立即表达，它们通常编码调控因子，调控病毒下游基因的表达，或者调整病毒增殖所需的宿主细胞生理环境，从而达到促进病毒增殖的目的。对于病毒极早期基因转录调控的研究，有助于了解病毒侵染早期的机制，为今后研发抗病毒药物提供潜在靶点。 目前，共21个WSSV极早期基因得到了鉴定。然而，其中大多数基因的转录调控机制依然未知。本文针对18个极早期基因5端序列进行转录活性分析，鉴定得到8个启动子功能区。我们通过5RACE实验测定了这些具有启动子功能区的极早期基因的转录起始位点。这些极早期基因启动子在转录起始位点上游约30bp几乎都具有TATAbox，而wsv051，wsv108和wsv465的转录起始位点具有节肢动物转录起始保守元件(A/C/T)CA(G/T)T。 为了鉴定参与转录调控的启动子核心元件，我们构建了一系列极早期基因启动子（包括P051，P056，P083，P108，P249，P403和P465）分段缺失突变质粒。所有缺失TATAbox的突变，启动子活性都降低至阴性水平。TATAbox在转录起始中的必要性证明宿主的RNA聚合酶Ⅱ参与了WSSV极早期基因的表达。此外，除了TATAbox以外的一些启动子缺失突变也同样导致启动子活性的明显下降，包括P051的-625/-436区域，P056的-419/-285区域，P083的-475/-384区域，P403的-278/-178区域，P465的-264/-187区域。P249突变缺失-554/-331，-330/-221和-220/-151导致启动子活性从100％分别降低至83％，63％和28％。CRE转录调控元件(TGACGTCA)在多个WSSV极早期基因启动子功能区存在。针对这些CRE位点特异性突变实验证明，突变后的P403和P465的启动子活性大幅度降低，表明在这两个启动子中CRE元件对于WSSV极早期基因转录具有重要功能。 我们的实验结果提供了WSSV极早期基因启动子的全面信息，将会有助于我们更深刻地认识病毒基因的转录调控过程。