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仔猪断奶会引起一系列的应激反应,如引起仔猪食欲差、消化功能紊乱、腹泻、生长缓慢等,这一直是困扰养猪业的难题,而断奶应激对肠道屏障的损伤是实施早期断奶的最大技术障碍。肠道既是消化和吸收的主要场所,也是体内最大的免疫器官,通过营养调控手段来改善仔猪肠道环境,增强肠道免疫功能是提高机体抗病力、促进仔猪健康发育的重要手段。因此寻找成本低廉、来源广泛、易于加工的生产原料就显得极为重要。本实验从仔猪早期断奶前后生长性能、血清激素水平、消化酶发育和细胞因子水平等方面,研究了大豆肽对大豆肽对仔猪断奶前后消化生理及免疫功能的影响,为开发和利用大豆肽提供实验依据。主要研究内容包括:
⑴大豆蛋白复合酶解肽的制备。采用chen法对大豆蛋白进行分离纯化,用微量凯氏定氮法测定蛋白含量;优化反应条件,制备大豆蛋白复合风味酶酶解物。用茚三酮法测定水解蛋白的氨基含量,计算酶解肽的平均肽链长度。结果:复合风味酶在pH7.0,50℃,8小时酶解大豆蛋白,酶解液水解度为22.14%,平均肽链长度为5。
⑵添喂大豆肽对仔猪生产性能和血清激素水平的影响。选择40头新生仔猪随机分为2组:对照组和试验组,对照组断奶前按常规补料,试验组基础日粮+2%大豆肽。21日龄时一次性断奶。仔猪分2次屠宰,分别在21日龄与35日龄时,每组随机取6头仔猪,早上8:00空腹称重,迅速屠宰后肝脏称重。取血清,测定胰岛素、尿素氮水平。结果表明:试验组21日龄和35日龄仔猪增重分别高于对照组7.90%,8.66%;肝脏重量比对照组分别高9.79%,10.80%。仔猪胰岛素水平高于对照组分别为15.43%,7.04%;仔猪尿素氮分别高于对照组32.72%,13.22%。结果提示给早期断奶仔猪添喂一定量的大豆肽,对早期断奶前后仔猪增重、脏器的生长都有一定的促进作用。对早期断奶应激造成的不良影响有一定的改善作用。
⑶大豆肽对仔猪断奶前后消化道酶的影响。取一定量-18℃冻存的消化道内容物,4℃条件下缓慢解冻。按照m(消化道内容物):V(生理盐水)=1:1的比例加入生理盐水,于4℃条件下3000r/min离心15min,取上清液备用。分别采用比色法、比浊法和酪蛋白底物测定法检测仔猪胃蛋白酶总活性,十二指肠内容物淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶总活性。结果试验组的21日龄和35日龄仔猪胃蛋白酶总活性,十二指肠内容物淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶总活性分别高于对照组6.14%,11.22%,26.08%,27.12%和11.73%,0.96%,7.78%,28.37%。结论:饲喂大豆肽,对仔猪断奶前后消化酶有一定的促进作用,当仔猪日龄达到传统断奶日龄时,仔猪消化酶系统逐渐繁育完善,这时大豆肽对消化酶系统的促进作用减弱。
⑷大豆肽对仔猪断奶前后消化道免疫功能影响。称取实验二一屠宰仔猪脾脏、胸腺、淋巴结重量,计算相对重量。取整段空肠,除去内容物,刮取粘膜后,称取空肠组织100mg于1mL总蛋白抽提液中,用玻璃匀浆器冰浴中上下匀浆15次,在4℃以10000r/min离心匀浆液5min后取上清液,用于细胞因子测定;取0.5mL空肠黏液,并用2ml、0.01M PBS稀释后,4℃10000r/min离心5min,取上清液,用于检测sIgA含量。组织和黏液上清液分别用考马斯亮蓝法进行蛋白定量,并于-20℃保存备测.用放射免疫法测定IL-2、IL-6和TNF-α含量。结果免疫脏器相对重量实验组与对照组差异不显著。试验组的21日龄仔猪IL-2、IL-6和TNF-α比对照组高21.63%,48.08%,32.89%;试验组的35日龄仔猪IL-2、IL-6和TNF-α高于对照组8.74%,12.13%,15.75%。试验组的21日龄和35日龄仔猪分泌型免疫球蛋白A(sIgA)分别比对照组高11.67%,0.54%。早期断奶仔猪饲喂大豆肽,对仔猪断奶前后免疫细胞因子生成有一定的促进作用,能够缓解仔猪早期断奶应激的免疫抑制作用。