板栗壳的化学成分研究

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板栗壳为板栗(Castanea mollissima Blume)的总苞,性甘、平,味涩,无毒,具有补肾强筋、健脾益气、散结解毒之功效,可以治疗肿毒、丹毒、瘰疬等疾病。板栗(Castanea mollissima Blume)属壳斗科(Fagacaea)栗属(Castanea)植物。板栗的入药部位有树根、树皮、叶、花、外果皮、内果皮、总苞等。本课题旨在对板栗壳的化学成分进行研究,为板栗壳进一步的开发利用提供一定的基础。本课题主要分为三部分,第一部分为板栗壳中化学成分的提取,第二部分对分离得到的部分化合物进行活性筛选,第三部分为板栗壳的特征图谱的建立。采用95%乙醇对板栗壳的干燥粉末进行渗漉提取,得到提取物总浸膏。加适量水将浸膏制成悬浮液,再依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到不同极性部位。本研究主要对乙酸乙酯部位进行研究,通过硅胶柱层析、RP-C18反相柱层析、SephadexLH-20凝胶柱层析、重结晶等分离纯化手段,得到7个单体化合物。通过与对照品进行对照,确定了3个化合物,即:β-谷甾醇(β-Sitosterol)(2)、齐墩果酸(Olean acid)(3)、山奈酚(kaempferol)(6),其他化合物由1H-NMR、13C-NMR、EI-MS等波谱分析数据确定化学结构。最终确定为:甲苯2,6-二氨基甲酸甲酯(Toluene 2,6-2 methyl carbamate)(1).芹黄素(Apigenin)(4)、桦木酸(Betulinic acid)(5)、没食子酸(gallicacid)(7)。其中,化合物4、5为首次从该植物中分离,化合物1为首次由栗属植物中分离。采用CCK8法,利用人乳腺癌MCF-7细胞、PC-12神经癌细胞、SMMC-7721肝癌细胞对得到的化合物4、5、6三个化合物进行抗癌活性研究。实验结果显示三个化合物对PC-12无明显抑制作用,对MCF-7、SMMC-7721均有一定的抑制作用。利用HPLC法,同时测定板栗壳中山奈酚、槲皮素、没食子酸、熊果酸的含量。色谱方法为:InertSustain C18(5um,4.6×250mm),流动相为乙腈-0.4%磷酸(0-20min,4%~5%;20~21min,5%~28%;21~70min,28%~33%;70~71min,33%~93%;71~90mmin,93%-95%),检测波长为没食子酸270nm、槲皮素和山奈酚365nm、熊果酸210nm,柱温30℃,流速08ml/min。没食子酸的线性方程为y=3353.8x+58157,r=0.9997,在36-360μg范围内与峰面积线性关系良好;槲皮素的线性方程为y=3751.4x+574.79,r=0.9996,在9-90pg范围内与峰面积线性关系良好:山奈酚的线性方程为y=5680.3x+3969.3,r=0.9999,在36-360μg范围内与峰面积线性关系良好;熊果酸的线性方程为y=575.55x-2305.8,r=0.9997,在71.6-716μg范围内与峰面积线性关系良好。
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