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本论文包括三部分内容:一、天麻多糖的提取、分离、纯化;二、天麻均一多糖的结构鉴定;三、天麻多糖的生物活性筛选。
第一部分:对天麻多糖成分的研究采用沸水提取,95%乙醇沉淀,淀粉酶除淀粉,最后冷冻干燥得到天麻粗多糖。天麻粗多糖经DEAE-Sepharose Fast Flow凝胶柱层析分成五个具有不同电荷性质的多糖部位,用HPGPC法测定其分子量分布后选用合适的分子筛凝胶柱层析,最后分离得到七个均一多糖GB I-1、GB I-2 GB I-3、GB II、GBIII、GBIV、GBV;其中GBII、GBIII、GBIV、GBV均为首次从天麻中分离得到。
第二部分:综合利用各种化学方法(糖组成分析、甲基化分析等)和谱学方法(13C-NMR、IR等)对七个均一多糖GB I-1、GB I-2、GB I-3、GB II、GBIII、GBIV、GBV的结构进行了详细的鉴定。结果表明:GB I-1是以α-D-1,4连接的葡萄糖构成主链,在葡萄糖6位带有少量分支,分子量为14600; GB I-2、GBI-3的分子量分别为8700、7000;笔者认为GB I-1、GB I-2、GB I-3虽然分子量不同,但结构相同,可能为同一均一多糖的不同降解片段。GB II是由27个葡萄糖组成的葡聚糖,分子量4300,以α-D-1,4连接的葡萄糖构成主链,在葡萄糖6位带有少量分支,其中尚含有少量葡萄糖醛酸。GBIII是一种果胶型多糖,分子量19000;主链骨架主要由1,4-连接的葡萄糖残基、1,4-连接的半乳糖残基、大量1,4-连接的半乳糖醛酸残基及少量1,2-连接的鼠李糖残基、1,2,4-连接的鼠李糖残基构成;在1,2,4-连接的鼠李糖残基的O-4位、1,4,6-连接的葡萄糖残基的O-6位形成分支点。侧链是有端基阿拉伯糖残基、1,5连接的阿拉伯糖残基;端基葡萄糖残基、1,4-连接的葡萄糖残基;端基半乳糖残基、1,4-连接的半乳糖残基;端基半乳糖醛酸残基、1,4-连接的半乳糖醛酸残基构成;GBIII中半乳糖醛酸含量为51.3%,其中大量半乳糖醛酸已成酯。GBIV是果胶型多糖,分子量87000;主链骨架主要由1,4-连接的葡萄糖残基、1,4-连接的半乳糖残基、1,4-连接的半乳糖醛酸残基及1,2-连接的鼠李糖残基,1,2,4-连接的鼠李糖残基构成;在1,2,4-连接的鼠李糖残基的O-4位、1,4,6-连接的葡萄糖残基的O-6位形成分支点。侧链是有1,5-连接的阿拉伯糖残基;1,4-连接的葡萄糖残基、端基葡萄糖残基;1,4-连接的半乳糖残基、端基半乳糖残基;1,4-连接的半乳糖醛酸残基构成。GBIV中半乳糖醛含量为71.3%,其中大量半乳糖醛酸已成酯。GBV为硫酸多糖,分子量100000,硫酸基含量为25%;糖组成为葡萄糖和半乳糖,摩尔比为57:43。
第三部分:天麻多糖的生物活性筛选。通过生物化学和组织形态学方法,研究天麻葡聚糖对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤的影响,结果显示天麻葡聚糖对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤具有很好的保护作用。GBIII,GBIV,GBV对ConA诱导的T细胞增殖反应和LPS诱导的B细胞增殖反应均具有一定促进作用,且具有浓度依赖关系; GB I-1、GBII的效果不明。GBIII、GBV对核转录因子NF-κB具有明显的激活作用;且GBV激活作用随浓度增加而加强。实验所用的天麻粗多糖剂量对小鼠移植性肿瘤没有抑制作用。