中医药苦黄汤抗大鼠原位肝移植急性排斥的实验观察

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目的:建立稳定的大鼠肝移植模型,并探讨清热解毒、活血化瘀复方中药(苦黄汤)对大鼠原位肝移植急性排斥反应(AR)的影响。方法:1、运用改良的Kamada二袖套法实行大鼠原位肝移植手术(供受体均为SD大鼠),术中采用袖套法对肝下下腔静脉、门静脉进行吻合,而肝上下腔静脉采用缝合法吻合,胆总管采用支架法进行重建。2、以Wistar大鼠(80例)作为供体、SD大鼠(80例)作为受体,建立大鼠原位肝移植AR模型80例,并将其随机分为生理盐水组(20例)、复方中药组(20例)、环孢素A组(20例)、复方中药加环孢素A组(20例)。3、给药方法为灌胃给药,给药时间为术前第1天开始至术后30天,2ml/次/d。生理盐水组仅给予生理盐水2ml/d,复方中药组给予复方中药2ml/d,环孢素A组给予环孢素A10mg/kg/次/d,复方中药加环孢素A组给予复方中药1ml/次/d+环孢素A5mg/kg/次/d。4、各组模型大鼠于术后第1、3、5、7天分别经尾静脉取血,ELISA法检测白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-10(IL-10)的含量。5、术后第7天,每组各处死10只大鼠,取腔静脉血检测谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)的值,光镜下观察肝脏组织病理改变及计算排斥反应活动指数(RAI)。每组余下大鼠观察生存期。结果:1、操作熟练之后的50例SD→SD大鼠原位肝移植手术中,供体大鼠取肝脏手术时间为(34.44±3.25)min,供肝热缺血时间均接近0~1min;受体大鼠肝移植手术时间为(49.07±4.93)min,无肝期(17.26±2.51)min。大鼠原位肝移植术后1天、1周的生存率分别为92%(46/50)、86%(43/50)。2、复方中药、环孢素A、复方中药加环孢素A组模型大鼠的存活时间分别为(14.0±1.4)d、(18.4±1.5)d、(27.8±2.0)d,与生理盐水组的存活时间(8.7±0.8)d比较差异具有显著性(P<0.05)。3、在第1、3、5、7天同一时间点,复方中药、环孢素A、复方中药加环孢素A组大鼠外周血IL-2的含量与生理盐水组大鼠的比较显著地降低(P<0.05)。4、在第1、3、5、7天同一时间点,复方中药、复方中药加环孢素A组大鼠外周血IL-10的含量与生理盐水组大鼠的比较显著地升高(P<0.05),而环孢素A组大鼠外周血IL-10的含量与生理盐水组大鼠的比较差异无显著性(P>0.05)。5、术后第7天,大鼠外周血AST值、ALT值在复方中药组为(648.7±140.3、701.7±126.4)u/l、环孢素A组为(421.5±92.8、466.8±98.2)u/l、复方中药加环孢素A组为(210.7±86.7、228.1±78.5)u/l与生理盐水组(995.4±165.7、952.6±153.7)u/l比较显著下降,其差异具有显著性(P<0.05),其中以复方中药加环孢素A组最为显著。6、术后第7天,复方中药组大鼠移植肝排斥反应活动指数(RAI)(5.43±0.41)、环孢素A组(4.90±0.42)、复方中药加环孢素A组(3.39±0.36),与生理盐水组(7.84±0.61)比较显著降低(P<0.05),其中以复方中药加环孢素A组最为显著。结论:1、本研究建立的大鼠原位肝移植模型成功率高、方法简单、无需吻合肝动脉。2、清热解毒、活血化瘀复方中药(苦黄汤)对大鼠原位肝移植AR具有抑制作用,且与环孢素A联合具有协同作用,其机理可能与降低IL-2,上调IL-10相关。
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