【摘 要】
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目的:通过siRNA介导的肝癌细胞株Bel-7404中OY-TES-1基因表达抑制研究,筛选干扰效率较高的siRNA序列,为后续的相关研究奠定基础。方法:(1)筛选OY-TES-1表达阳性的肿瘤细胞株:
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目的:通过siRNA介导的肝癌细胞株Bel-7404中OY-TES-1基因表达抑制研究,筛选干扰效率较高的siRNA序列,为后续的相关研究奠定基础。方法:(1)筛选OY-TES-1表达阳性的肿瘤细胞株:①mRNA水平筛选:RT-PCR法;②蛋白质水平筛选:免疫组织化学和Western blot;(2)siRNA转染:采用阳离子脂质体法将化学合成的siRNA转入细胞;(3)检测转染率:FAM标记的随机序列;(4)细胞转染siRNA后OY-TES-1基因沉默效果检测:RT-PCR和Western blot。结果:(1)RT-PCR和Western blot分别检测到肝癌细胞株Bel-7404中OY-TES-1在mRNA水平和蛋白质水平都有较强表达;(2)siRNA成功转入肝癌细胞株Bel-7404细胞中;(3)转染后Bel-7404细胞中OY-TES-1在mRNA水平和蛋白质水平的表达都受到明显抑制。结论:成功干扰了Bel-7404细胞中的OY-TES-1基因,并筛选出干扰效率较高的干扰序列。
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