紫蛇尾(Ophiopholis mirabilis)皂苷制备工艺及抑菌和抗氧化作用研究

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本论文以黄渤海交汇处的烟台长岛县大钦岛海域的紫蛇尾(Ophiopholis mirabilis)为实验材料,理论分析了紫蛇尾皂苷制备的工艺流程,实验研究了工艺流程中的几个环节,包括紫蛇尾皂苷含量的测定方法,皂苷提取的最佳工艺条件,皂苷经过大孔吸附树脂除杂的工艺条件,皂苷过硅胶柱纯化的结果和过硅胶柱所得的皂苷的抑菌、抗氧化活性研究,为紫蛇尾皂苷作为未来的一种海洋新药提供研究依据。  首先,经过实验,建立了紫蛇尾甾体皂苷的含量测定方法—甲醇-硫酸显色法。用对照品测定的标准曲线方程:y=0.006x+0.065 R2=0.988,在0~500ug/mL浓度范围内浓度与吸光度线性良好,并对显色方法的稳定性,仪器的精密性和加样回收率方面进行了测定,结果表明甲醇-硫酸法可用于紫蛇尾皂苷的含量测定,准确、简便。  研究了皂苷提取的最佳工艺条件。影响皂苷提取主要有五大因素,即乙醇体积分数、温度、料液比、提取次数、提取时间,在乙醇体积分数不变的情况下,通过单因素试验选出各因素的最佳三个水平,再通过正交实验来选择提取的最优组合,以达到最高的提取率。结果表明,影响提取的四因素的主次关系为:温度、提取时间、料液比、提取次数,得出的最佳组合为温度50℃,以1:30的料液比,提取6次,每次4小时,能使皂苷的提取率达到2.18‰。  研究了大孔树脂吸附除杂工艺。先对4种对皂苷吸附量较大的树脂进行比较、筛选,最终从吸附量和解吸率两方面确定了紫蛇尾皂苷的分离用树脂 AB-8。再从吸附与解吸两方面试验了AB-8对紫蛇尾皂苷分离的特性,包括上样浓度、上样流速和泄露曲线,解吸剂浓度、解吸剂用量和解吸曲线。结果表明,上样浓度为2mg/mL,流速慢,上样量为2.5BV时,树脂能最大量的吸附皂苷,解吸剂用50%的酒精,解吸流速慢,解吸剂用量为3BV时,皂苷的解吸率能达到91.43%。最后,薄层层析板结果表明,AB-8分离效果好,分离后的化合物Rf值差距较大,可用于下一环节的硅胶柱分离纯化。  硅胶柱分离纯化,所用洗脱剂为氯仿-甲醇-水(7:3:0.5),等度洗脱,出现了浓度较大的较纯组分,分离效果较理想。  对紫蛇尾皂苷主要做了抗菌药物抑菌性能典型的两个试验,抑菌圈试验和最低抑菌浓度试验。抑菌圈试验结果表明在皂苷提取、分离的各环节的产品,都对细菌和真菌有抑制作用,表明皂苷为抗菌药物;抑菌能力比较上,皂苷对大肠杆菌的抑菌能力大于对金黄色葡萄球菌的,对啤酒酵母菌的抑菌能力大于对黄曲霉的;随着皂苷纯度的增加,抑菌作用明显增加,所以,要得到理想的抑菌效果,还需要就皂苷继续分离提纯。最低抑制浓度结果是四种菌的MIC值分别为0.01mg/mL,0.05mg/mL,0.5mg/mL,0.5mg/mL,表明该皂苷对细菌的MIC值要小于对真菌的。  对紫蛇尾皂苷的抗氧化性能的测定表明,皂苷对羟自由基(·OH)和超氧阴离子(O2-)的清除率很高,抗氧化性能高,是很好的抗氧化剂。
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