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人体衰老已成为严重的社会和家庭问题。而解决这个问题的唯一途径就是提高老年人的健康水平。生殖功能衰老是机体整体功能衰老的基础。衰老不仅导致生殖功能减退,并伴有骨质疏松、易疲劳等更年期症状,同时也与各种老年疾病的发生密切相关。中医理论认为肾虚是衰老的根本内因。补肾健脾方剂何首乌饮具有益精血、补肝肾、健脾和延年益寿之功效。本研究选用D-半乳糖腹腔注射建立亚急性衰老雄性大鼠模型,探讨何首乌饮对衰老雄性大鼠睾丸Bcl-2和Bax表达的影响,为延缓衰老提供理论和实验依据,
目的:
观察何首乌饮对D-半乳糖所致亚急性衰老模型大鼠睾丸组织SOD活性和MDA含量的变化,睾丸组织Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。
方法:
1.动物模型的建立及分组:选用清洁级8周龄SD雄性大鼠40只,体重180-220g,购自河北医科大学实验动物中心提供。将大鼠随机分为:正常对照组(N)、模型组(M)、何首乌饮预防组(P)和何首乌饮延缓衰老组(T),每组10只。除正常组外,均采用6％D-半乳糖溶液(300mg·kg-1·d-1,60d)连续腹腔注射建立亚急性衰老模型。在第60 d大鼠经内眦眶后静脉取血约1.5 ml,离心取上清,检测血清睾酮的含量判断造模是否成功。待造模成功后,何首乌饮延缓衰老组给予何首乌饮4.8 g/ml(1ml/100g)灌胃,模型组灌喂等量的生理盐水,何首乌饮预防组在腹腔注射D-半乳糖溶液的同时灌胃何首乌饮4.8 g/ml(1ml/100g)。
2.标本处理
(1)大鼠用水合氯醛(10%)麻醉,在内眦眶后静脉采血约1.5 ml,离心取上清。采用放射免疫法检测血清睾酮的含量,与正常组比较,睾酮含量下降显著后,认为模型建立成功。
(2)取3只大鼠用4%多聚甲醛灌注固定,取睾丸组织常规石蜡包埋,用于制备石蜡切片。
(3)其余大鼠断头处死迅速取出双侧睾丸放入液氮中,采用生物化学方法检测睾丸组织SOD和MDA含量,Western Blot法检测大鼠睾丸Bcl-2和Bax蛋白的表达。
结果:
1.何首乌饮对睾丸组织SOD和MDA含量的影响
模型组(M组)大鼠睾丸组织MDA的含量明显升高SOD显著下降,与正常对照组(N组)大鼠比较差异显著(P＜0.01);何首乌饮可以提高SOD的活性,降低MDA的含量,与模型组比较差异有显著性(P＜0.01),且预防组优于延缓衰老组(P＜0.05)。
2.睾丸组织Bcl-2的表达
免疫阳性产物分布在细胞质,Bcl-2在精母细胞、睾丸间质细胞、精子细胞均有表达,呈棕黄色的弥散颗粒状。模型组与正常组相比明显降低(P＜0.01);用药组均能提高睾丸Bcl-2的表达。何首乌饮预防组明显好于其他各组(P＜0.05)。
3.睾丸组织Bax蛋白的表达
免疫组织化学染色:免疫阳性产物分布在细胞质,各组大鼠睾丸组织均可见Bax染色,Bax蛋白在支持细胞、精原细胞和间质细胞均有表达,呈棕黄色散在分布。Western Blot检测睾丸组织Bax蛋白的表达,模型组与正常组相比明显升高(P＜0.01);何首乌饮用药后均能降低睾丸Bax蛋白的表达(P＜0.01)。何首乌饮预防好于其余各组(P＜0.05)。
结论:
1何首乌饮能够降低衰老大鼠睾丸组织MDA的含量,提高SOD的活性。
2何首乌饮能够提高衰老大鼠睾丸组织Bcl-2蛋白的表达。
3何首乌饮可以明显降低D-半乳糖所致亚急性衰老大鼠睾丸Bax蛋白的表达。