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吗啡是针对中、重度疼痛有良好药效的镇痛药物之一,但是吗啡的众多副作用如耐受、成瘾、过敏等严重影响了吗啡的实际应用。尤其是吗啡的镇痛耐受,随着吗啡的长期给予,镇痛效果逐渐降低,为维持疗效而不断加大的吗啡用量可导致呼吸抑制等严重不良反应。为降低吗啡用量,联合用药是临床上常用的对策。有研究显示,联合应用吗啡和加巴喷丁在正常动物和急性痛模型动物可明显增强的镇痛效应。然而,临床上长期应用吗啡只是针对慢性痛患者。为此,本实验在强直刺激坐骨神经(TSS)诱导的神经病理性痛模型大鼠系统观察长期给予加巴喷丁能否对抗吗啡镇痛耐受的发生,并对其可能的机制进行了初步探索。主要结果如下：1、在神经病理性痛条件下,长期应用加巴喷丁未能对抗吗啡的镇痛耐受与我们先前的报道相一致,强直刺激(TSS)大鼠坐骨神经可诱发触诱发痛和热痛过敏；连续9天给予吗啡(s.c.10mg/kg,每天两次)产生明显的镇痛耐受,给药后7-9天,测试剂量的吗啡(i.p.5mg/kg)缺乏镇痛作用。出乎意料的是,联合应用加巴喷丁(GBP,50mg/kg,i.p.每天两次连续9天)和吗啡,除首次联合应用产生更强镇痛效应外,GBP未能阻止或延缓吗啡耐受的发生；不仅如此,长期应用GBP对神经病理性痛的累加抑制效应在联合给予吗啡后也完全丧失。2、阻断胆囊收缩素受体CCK-2可对抗吗啡镇痛耐受挽救加巴喷丁的镇痛作用胆囊收缩素受体(CCK)是内源性抗阿片物质,体内CCK-8水平的增加被认为是吗啡镇痛耐受的原因之一。我们在吗啡耐受动物,即连续给予吗啡的第9天,单次鞘内给予CCK-8受体CCK-2R的特异性拮抗剂LY225910 (25ng)能明显挽救吗啡以及吗啡联合GBP的镇痛作用；在长期应用吗啡联合GBP的神经病理性痛大鼠,同时鞘内渗透泵持续给予LY225910 (9-10天)可以部分减缓镇痛耐受的发生。3、CCK-2R与钙通道α2δ-1亚基相互作用可能参与吗啡耐受对加巴喷丁镇痛的抑制。已知GBP的作用靶点主要是电压依赖钙离子通道α2δ-1亚基。免疫双标记实验发现,α2δ-1亚基和CCK-2R在脊髓背角和背根神经节DRG神经元上均有共表达；免疫共沉淀结果显示α2δ-1亚基和CCK-2R在脊髓和DRG组织中存在直接的相互作用。进一步,我们检测了神经病理性痛及吗啡镇痛耐受条件下是否有CCK-2R和α2δ-1亚基在脊髓表达水平的上调。Western blot分析显示,TSS可以增加脊髓和DRG中CCK-2R的水平,连续多次注射吗啡也可以进一步增加CCK-2R的水平；GBP可以抑制α2δ-1亚基在脊髓中的表达,但在吗啡耐受后,GBP不再能降低脊髓α2δ-1亚基的表达水平。最后,我们发现,直接鞘内注射CCK-8(300ng/15μl)可在正常大鼠引起类似神经病理性痛样的行为痛敏反应,GBP不能抑制该痛敏行为。综上所述,本研究证明,在强直刺激坐骨神经诱导的神经病理性痛模型动物,单次给予加巴喷丁(GBP)和吗啡可产生增强的镇痛效应,但随着给药次数增加和给药时间的延长,镇痛耐受发生,表明GBP并不能对抗吗啡镇痛耐受；反过来,长期给与GBP对神经病理性痛有累加镇痛效应,同时联合慢性吗啡可抑制GBP的镇痛作用,CCK-8及其受体CCK-2R可能参与这一过程。