土传病害拮抗放线菌的筛选及功能研究

• 作 者: 赵丽坤
• 机 构: 兰州交通大学
• 出 处: 兰州交通大学
• 发表日期: 2013年01期
• 关键词: 放线菌 拮抗性筛选 鉴定 活性产物

放线菌为一种常见的土壤微生物，因其可产生抗生素等活性物质而备受关注，其具有巨大的经济及开发价值。本论文对采自于兰州兴隆山的土壤进行了放线菌的分离、拮抗放线菌的筛选、菌种鉴定、诱变选育、发酵条件研究和活性化合物的初步分离鉴定等方面的研究，研究结果包括以下内容：（1）放线菌的分离。本研究在前人研究的基础上进行探索，获得一种更加适宜的方法：采样后将土样于室温下自然风干，用0.05%十二烷基硫酸钠对其悬浮液进行处理，随后40℃恒温振荡20min，再用稀释平板法接种到含有200mg/L重铬酸钾的高氏一号琼脂培养基上，培养7天后对放线菌进行分离。共分离获得10株放线菌菌株。（2）拮抗放线菌的筛选。以尖孢镰刀菌等植物病原菌为供试菌株对分离获得的10株放线菌采用平板对峙法筛选出8株具有抗菌活性的菌株，并对8株菌株的发酵液采用抑制菌丝生长速率法进行复筛获得抑菌效果最强的菌株K2。（3）菌种鉴定。根据放线菌K2菌株的形态特征、培养特征、生理生化特征和16SrDNA序列比对的研究结果表明，菌株K2为链霉菌属。将其16S rDNA序列于GenBank中注册，登录号为JX501990。（4）菌株K2发酵条件研究。以对尖孢镰刀菌等植物病原菌抗性为指示，研究了菌株K2产活性物质的最佳发酵培养基，实验结果表明，最佳发酵培养基是马铃薯葡萄糖培养液；最佳发酵时间为4天；最佳装液量为50mL；最佳接菌量为5%。（5）诱变选育。研究了紫外线和亚硝基胍对K2菌株的诱变效应，结果表明，在这两种诱变剂中，亚硝基胍的诱变效应强于紫外线。初步确定了K2菌株的最佳诱变剂为亚硝基胍，最佳处理剂量为1mg/mL，处理时间为45min。（6）菌株K2发酵液稳定性研究。研究分析了温度、紫外线及酸碱对K2菌株发酵液的影响，结果表明：放线菌K2菌株发酵液对温度相对稳定，而对酸碱及紫外线辐射较为敏感。（7）菌株K2发酵液抑菌谱的测定。以尖孢镰刀菌等植物病原菌和大肠杆菌等细菌为供试菌株，研究表明，菌株K2发酵液对植物病原菌有较广的抑菌谱，但对供试的细菌没有抑制作用。（8）活性化合物的分离鉴定。从放线菌菌株K2的发酵产物中分离纯化出2个化合物，进行核磁分析并结合参考文献初步确定一种为不饱和脂肪烃类物质，另一种为哌嗪类物质。