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为提高黑曲霉产糖化酶的能力，改善其生产性能，尽快提高糖化酶工业企业的经济效益，本文对曲霉属(ASPERGILLUS)种间灭活原生质体融合及杂交育种技术进行了研究。首先对黑曲霉UV-11-46(Aspergillus niger UV-11-46)进行了原生质体灭活研究，获得了原生质体的对温度、紫外线、亚硝酸的临界致死剂量；其次以黑曲霉UV-11-46和臭曲霉2044(A.foetidus,2044，Lys-)为亲本，PEG为融合剂，成功地实现了种间灭活原生质体融合；最后对获得的融合再生菌株进行分析检测，初步确定4株为种间融合子，并进行摇瓶验证。结果如下：
1、黑曲霉原生质体的制备及再生：在每个铺有玻璃纸的GM平板上接种6～8滴浓度为10<'6>个/ml左右的纯净孢子悬浮液，31℃静止培养18小时，以0.8MNaCl作渗透压稳定剂，1.5％溶壁酶(Lywallzyme)31℃静置酶解3.5～4小时，原生质体产量可达10<'6>～10<'7>个/ml。以0.6M蔗糖作渗透压稳定剂，在拉氏高渗固体培养基上夹层再生，可获得20％以上的再生率。
2、臭曲霉原生质体的制备及再生：在每个铺有玻璃纸的GM平板上接种5～6滴浓度为10<'7>个/ml左右的纯净孢子悬浮液，31℃静止培养10小时，以0.8MNaCl作渗透压稳定剂，1.5％Lywallzyme、31℃静置酶解2.5～3小时，原生质体产量可达10<'6>～10<'7>个/ml。以0.6M蔗糖作渗透压稳定剂，在拉氏高渗固体培养基上夹层再生，可获得20％以上的再生率。
3、黑曲霉原生质体灭活条件：当原生质体浓度为10<'6>个/ml时，经50℃、5分钟热处理、20W紫外灯40cm距离照射150秒、0.025MHN02在pH4.6、31℃条件下处理9分钟，原生质体均可达到100％全灭活。
4、原生质体融合条件：经紫外线、热、亚硝酸灭活的黑曲霉原生质体与臭曲霉活原生质体混合，在35％PEG、pH7.5、0.01MCaCl<,2>、35℃条件下处理20分钟，融合率分别为2.70×10<'4>、1.30×10<'4>、2.25×10<'4>。
5、黑曲霉原生质体经紫外线、亚硝酸以及紫外线-氯化锂复合诱变，得到102号突变菌株，经摇瓶稀配方初筛、浓配方复筛，得到58、64、69、90号菌株，产糖化酶活力比对照株分别高24.16％、15.53％、16.81％、11.99％，将它们分别命名为P-58、P-64、P-69、P-90。
6、原生质体融合后获得的再生菌株，以融合子的检测分析，初步确定4株为融合株，经摇瓶浓配方复筛，其产糖化酶活力比对照株分别高19.75％、27.18％、30.64％、30.89％，将它们分别命名为NF-15、NF-19、NF-21、NF-46。