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目的:初步分析肾综合征出血热(HFRS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中TCRB链和TCRa链各家族CDR3谱系漂移的变化;分析患者克隆性增殖家族(溶解曲线单峰)CDR3的分子特征。
方法:采取15例HFRS患者及4例健康志愿者的外周血,提取外周血单个核细胞(PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,设计了26个人TRBV家族的特异性上游引物和一个共同的下游引物TRBC,34个人TRAV家族的特异性上游引物和一个共同的下游引物TRAC,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增26个人TRBV家族和34个人TRAV家族CDR3,溶解曲线法分析各TRBV和TRAV家族CDR3谱系的单、寡、多克隆增殖;并对β链和a链CDR3谱系中的克隆性增殖的家族进行扩增送测序,生物信息学分析克隆性增殖的TRBV和TRAV家族CDR3区的基因、氨基酸组成和特征。
结果:(1)4例健康志愿者及15例HFRS患者PBMC中26个TRBV和34个TRAV家族CDR3的FQ-PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶电泳上,多数家族CDR3在预测相应大小处显示一条模糊的条带,HFRS患者部分家族无条带;(2)4例健康志愿者PBMC中26个TRBV家族和34个TRAV家族的CDR3溶解曲线谱型为多克隆增生的分布;15例HFRS患者PBMC中26个TRBV家族和34个TRAV家族CDR3的溶解曲线谱型图上,多数家族为多克隆增生的分布,但部分出现数量不等的单峰、寡峰、表达极低的峰图,表现为不同的异常率[(单峰+寡峰+极低)/总的TRBV或TRAV家族]:(3)β链和a链单克隆性增殖家族的CDR3区有着不同的基因序列和氨基酸组成,不同患者的CDR3存在部分的共同基序。
结论:HFRS患者PBMC中β链和a链各家族CDR3溶解曲线谱型图出现了单、寡、多克隆增殖家族,表现为不同的异常率;克隆性增殖的TRBV或TRAV家族有着不同的CDR3基因和氨基酸组成,但存在部分共同基序;提示HFRS患者外周血中存在克隆性增殖TRBV或TRAV家族的T细胞,为HFRS患者T细胞应答的研究提供了基础。