动物腔前卵泡分离培养的研究

来源 :广西大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:purplerain9112
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1.探讨了水牛和小鼠的各级腔前卵泡在卵巢中的分布规律、形态特征及超微结构特点。(1)水牛和小鼠卵巢中各级卵泡的分布具有明显的区域性,原始卵泡和初级卵泡分别位于血管稀少的皮质最外层和中层,而次级卵泡位于富含血管的皮质最内层。(2)水牛成年牛的原始卵泡的直径明显大于胎牛和青年牛(p<0.05),而三者的卵母细胞直径和颗粒细胞数没有差别;成年牛的初级卵泡的直径和卵母细胞直径显著大于胎牛和青年牛,颗粒细胞数也显著较多(p<0.05)。胎牛的次级卵泡的直径和卵母细胞直径显著小于成年牛和青年牛,颗粒细胞数也显著较少(p<0.05),次级卵泡的颗粒细胞在2—4层时分布不均,一侧较多,而另一侧较少。(3)7d、14d和28d小鼠的原始卵泡的直径、卵母细胞直径和颗粒细胞数均没有差异,赤道面颗粒细胞数约为10个。7d小鼠初级卵泡和次级卵泡直径和卵母细胞直径显著小于14d和28d小鼠,颗粒细胞也少(p<0.05)。(4)水牛和小鼠腔前卵泡的基膜由两层薄而光滑的纤维状结构组成,线粒体中有帽状结构,卵母细胞的细胞器集中于细胞核附近。 2.探讨了不同分离方法对水牛腔前卵泡分离效果的影响。梳刮法平均每个水牛卵巢回收所得的腔前卵泡数(152.35±44.81)明显高于剪碎法(32.62±14.81)和显微分离法(8.95±3.44,p<0.05),且其平均每个卵巢的处理时间(39.05±4.27min)明显少于剪碎法(46.43±4.15min)和显微分离法(44.55±7.82min,p<0.05)。梳刮法分离所得的腔前卵泡,其中原始卵泡最多(占41.25%),其次为初级卵泡(占38.79%),而次级卵泡最少(仅占19.95%)。结果表明,梳刮法能有效地分离回收水牛卵巢的腔前卵泡。 3.探讨了水牛胎牛、青年牛和成年牛卵巢腔前卵泡的分离效果。每个胎牛、青年牛和成年牛的卵巢分别获得943.43±143.13、249.50±40.11和128.50±19.99个腔前卵泡,胎牛卵巢获得的腔前卵泡数量明显多于青年牛和成年牛(p<0.05),表明水牛胎牛卵巢可分离得到较多的腔前卵泡。 4.探讨了剪碎结合酶消化法的水牛卵巢腔前卵泡分离效果。水牛卵巢先用眼科手术剪刀将其剪碎,然后分别用浓度为0(对照)、0.02%、0.04%、0.08%的胶原酶消化20min回收腔前卵泡,每个卵巢分别获得33.56±6.15、40.38±6.12、47.75±6.84和52.69±6.15个腔前卵泡,酶消化组的腔前卵泡数量明显多于单纯剪碎组(p<0.05),表 中文摘要明酶消化有助于提高剪碎法的腔前卵泡分离效率。 5.探讨了不同分离方法对小鼠卵巢腔前卵泡的分离效果的影响。梳刮法平均每个小鼠卵巢回收所得的腔前卵泡数明显高于剪碎法和显微分离法(61.00士9.12vs26.30士506和14.1肚4.61,p<0.05),且其每个卵巢的平均处理时间明显少于剪碎法和显微分离法(30.80士3.glmin vs 39.10士4.olmin和38.40士3.50min,p<0.05),梳刮法分离所得的小鼠腔前卵泡,次级卵泡最多(占83.61%),其次为初级卵泡(占12.13%),而原始卵泡最少(仅占4.26%),表明梳刮法也能有效地分离回收小鼠卵巢的腔前卵泡。 6.探讨了分离方法和水牛年龄对水牛腔前卵泡的体外发育能力的影响。用梳刮法、剪碎法和显微分离法获得的水牛卵巢腔前卵泡体外培养48h和72h,其存活率差异不显著(p>0.05)。体外培养72h,胎牛腔前卵泡存活率明显低于青年牛和成年牛 (34.69%vs 52.67%、52.03%,P<0.05)。剪碎结合酶消化法分离得到的水牛卵巢腔前卵泡在体外培养72h后的存活率随着胶原酶浓度的增加而逐渐下降,浓度达到0.08%时下降达到显著性水平。结果表明,分离操作方法对水牛腔前卵泡的培养存活率没有影响,但酶消化处理则降低腔前卵泡分离后的培养存活率;水牛胎牛分离得到的腔前卵泡比青年牛和成年牛分离得到的腔前卵泡更难培养。 7.探讨了卵泡培养密度对水牛腔前卵泡的体外发育能力的影响。培养到IOd,单独培养(每孔放1个卵泡)的卵泡存活率(30.36%)与直径增长(7 .71士2.29林m)显著低于群体培养A(每孔放2一3个卵泡,51.61%、10.19士3.24林m)和群体培养B(每孔放4一5个卵泡,52.24%、10.94士3.80林m,p<0.05),表明水牛腔前卵泡的群体培养效果优于单独培养效果。 8.探讨了卵泡大小对水牛卵巢腔前卵泡的体外发育能力的影响。体外培养10d,起始直径为101一120和扒21林m的卵泡的存活率显著高于三60、61一80林m和81一10如m的卵泡的存活率,起始直径扒21林m的卵泡的直径增长显著高于且20林m的卵泡的直径增长(p<0.05),表明直径较大水牛腔前卵泡的体外培养效果优于直径较小的腔前卵泡。 9.确定了水牛腔前卵泡体外培养胎牛血清(F Cs)的最佳浓度。体外培养10d,10%FCS组的卵泡存活率显著高于对照组和1%FCS组(p< 0.05),卵泡的直径增长了14.36士4.90林m,亦显著高于对照组和1%FCS组、5%FCS组和20%FcS组的直径增长(P<0.05),表明水牛腔前卵泡体外培养的适宜FsH浓度是10%一巧%。 10.比较了不同培养方法的水牛腔前卵泡体外培养效果。培养10d,三维培养法的卵泡存活率显著高于微孔板培养法和二维培养法(p<0.05),且卵泡直径平均增长了13.03士5.37林m,亦显著高于微孔板培养法和二维培?
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