鸦胆子去油种子废渣抑菌活性成分研究

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鸦胆子(Brucea javanica(L.)Merr.),苦木科(Simaroubaceae)鸦胆子属(Brucea)植物,别名老鸦胆、苦参子、小苦楝,常以果实和叶入药,为较常用中药,其医用研究已有广泛报道,利用主要为鸦胆子油,而提油后产生的废渣中仍含有多种抑菌活性成分。因此,本研究以鸦胆子去油种子废渣为研究对象,系统测定了其甲醇提取物、石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取物的抑菌活性,并通过生物活性跟踪对其抑菌活性部位的化学成分进行了分离,旨在探究鸦胆子种子去油后废渣的抑菌活性成分。主要研究结果如下:采用菌丝生长速率法,测定了鸦胆子甲醇提取物、石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对禾谷镰刀菌Fusarium graminearum Schw、茄子黄萎病菌Verticillium dahliae Kleb.和西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.niveum等20种供试病原真菌的抑菌活性,结果表明,在10 mg/m L浓度下鸦胆子甲醇提取物仅对水稻纹枯病菌Thanatephorus cucumeris(Frank)Donk.具有抑制活性,其抑制率为33.33%;但在5 mg/m L浓度下3种萃取物对供试病原真菌均具有较显著抑制作用,尤其乙酸乙酯萃取物的抑菌活性最为显著,对14种供试病原真菌均具有一定抑制作用,其中对甘蔗凤梨病菌Ceratocystis paradoxa(Dode)Moreau、火龙果溃疡病菌Neoscytalidium dimidiatum(Penz.)Crous&Slippers、甘蓝黑斑病菌Alternaria brassicicola(Schweinitz)Wiltshire、苦瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.momordicae和水稻纹枯病菌T.cucumeris的抑制率分别达到83.97%、75.71%、60.83%、56.47%和51.72%,EC50值分别为2.68、2.65、2.53、3.48和2.10 mg/m L。通过孢子萌发法测定了鸦胆子乙酸乙酯萃取物对火龙果溃疡病菌N.dimidiatum、苦瓜枯萎病菌F.oxysporum f.sp.momordicae和甘蓝黑斑病菌A.brassicicola孢子萌发的抑制作用,结果显示,乙酸乙酯萃取物对3种供试病原真菌孢子萌发的抑制作用均随浓度的升高而增强,在浓度为5 mg/m L时,其抑制率分别达到100%、96.51%和62.86%,EC50值分别为0.78、1.36和3.61 mg/m L。采用滤纸片法,测定了p H、温度、紫外光、自然光、氧化和金属离子等条件对鸦胆子乙酸乙酯萃取物抑菌活性的影响,结果表明,乙酸乙酯萃取物在p H 2.0-10.0条件下、40℃-121℃条件下处理30 min、紫外照射60 min、自然光照射12 h、氧化96 h及金属离子(Na+、K+、Ca2+和Mg2+)处理对其抑菌活性几乎没有影响。以生物活性跟踪为基础,综合运用中压制备、硅胶柱层析、凝胶柱层析、硅胶薄层层析等分离手段对乙酸乙酯萃取物的化学成分进行了分离,分离得到5个化合物,通过核磁共振谱(NMR)、质谱(MS)的图谱数据,并结合文献,鉴定出得到的化合物,分别为邻苯二酚(1)、benzofuran-2-carboxaldehyde(2)、1H-吲唑(3)、香草酸(4)、臭矢菜素A(5),其中,benzofuran-2-carboxaldehyde和1H-吲唑为首次从鸦胆子中分离得到。通过滤纸片法测定了邻苯二酚、benzofuran-2-carboxaldehyde、香草酸和臭矢菜素A对苦瓜枯萎病菌F.oxysporum f.sp.momordicae、甘蓝黑斑病菌A.brassicicola、火龙果溃疡病菌N.dimidiatum、甘蔗凤梨病菌C.paradoxa和水稻纹枯病菌T.cucumeris的抑菌活性。结果显示在200μg/m L浓度下化合物对5种供试病原真菌均无显著抑菌活性。上述试验结果表明,鸦胆子废渣对多种植物病原真菌具有显著的抑菌活性,废渣中含有具有抑菌作用的活性成分,但其抑菌活性成分还有待进一步分离,研究结果可为鸦胆子废渣在植物病害防控上的利用提供依据。
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