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采集自然感染温氏附红细胞体的奶牛颈静脉血,通过鲜血压片和血液涂片染色,在光学显微镜下观察红细胞和温氏附红细胞体的形态以及温氏附红细胞体的感染率;根据温氏附红细胞体的感染率将患病奶牛分组,无菌采取血液分别测定各组血清总蛋白(TB)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)的含量和血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力;在RPMI-1640培养基中分别添加不同比例的犊牛血清、葡萄糖和NaHCO3进行牛温氏附红细胞体的体外培养试验,通过对培养效果的比较来确定犊牛血清、葡萄糖、NaHCO3的添加比例,并依照确定的培养条件进行了咪唑苯脲+磷酸伯氨喹、咪唑苯脲+贝尼尔、咪唑苯脲+大蒜素等7种药物组合方案对温氏附红细胞体的体外药物杀灭试验,经综合评价后从中选择2种体外杀灭效果较好的药物组合方案,进行牛温氏附红细胞体病治疗试验,通过对治疗前后临床常规检查、血液涂片镜检、血液生理生化指标测定结果进行综合比较,确定治疗牛温氏附红细胞体病的首选药物组合方案。结果表明:
温氏附红细胞体主要附着在红细胞的表面,少数游离于血浆中;感染温氏附红细胞体的红细胞呈不规则形态;姬姆萨染色可见温氏附红细胞体呈紫红色,形态多样且具有一定的折光性。
随着温氏附红细胞体感染程度的增加,奶牛血清TB、ALB、GLOB的含量均逐渐降低;血清SOD、CAT、GSH-Px的活力也均逐渐降低;血清NO、MDA的含量逐渐升高。表明感染温氏附红细胞体后奶牛的肝脏功能受到一定程度的损伤且机体的抗氧化能力降低。
RPMI-1640培养液中添加30%犊牛血清、2.0%葡萄糖,0.20% NaHCO3在37℃、5%CO2的条件下进行培养,每12h更换一次培养液,作原代体外培养能够取得较高的感染率,且红细胞表面温氏附红细胞体数量也较多。
牛温氏附红细胞体体外联合药物杀灭试验中咪唑苯脲+磷酸伯氨喹、咪唑苯脲+金丝桃素药物组体外杀灭效果较理想,且在有效浓度范围内对红细胞的影响较轻微;咪唑苯脲+贝尼尔、咪唑苯脲+大蒜素、贝尼尔+氟苯尼考等效果也较好,但是对红细胞的损伤较重,青霉素+连霉素对温氏附红细胞体基本无作用,因此在治疗奶牛温氏附红细胞体病时选用咪唑苯脲+磷酸伯氨喹、咪唑苯脲+金丝桃素药物组合方案。
在奶牛温氏附红细胞体病体内治疗试验中经综合评价咪唑苯脲+磷酸伯氨喹药物组对温氏附红细胞体的治疗效果略好于咪唑苯脲+金丝桃素药物组,且对机体的毒副作用低,可首选咪唑苯脲+磷酸伯氨喹药物组合方案治疗牛温氏附红细胞体病。