【摘 要】
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人类免疫缺陷病毒(HIV)和人乙型肝炎病毒(HBV)感染是目前对人类威胁最大的两种病毒性传染病.HIV在感染后,经过至多十年的潜伏期后,会发展成获得性免疫缺陷综合征(AIDS),绝大
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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人类免疫缺陷病毒(HIV)和人乙型肝炎病毒(HBV)感染是目前对人类威胁最大的两种病毒性传染病.HIV在感染后,经过至多十年的潜伏期后,会发展成获得性免疫缺陷综合征(AIDS),绝大多数患者最终会由于并发各种感染或肿瘤而死亡;人乙型肝炎病毒可使患者长期处于低生活质量的状态,后期患者可发生肝硬化肝癌等病变,最终影响到人们的生存.本论文分两部分针对这两种病毒的化疗,即应用硫代反义寡核苷酸抑制肝炎病毒和采用化学合成药物抑制HIV蛋白酶进行了研究.首先,以鸭乙型肝炎病毒(DHBV)为模型,研究在DHBV DNA转录起始区域设计硫代反义寡核苷酸抑制DHBV DNA复制的可行性.设计合成了分别基于DHBV PreS1、PreS2、S抗原启动基因的硫代反义寡核苷酸,经OPC柱纯化后,用于效果鉴定.应用Southern blot实验和cpm计数测定其对原代鸭肝细胞中及雏鸭中感染DHBV的DHBV DNA的作用.结果表明在1.5μmol/L浓度下,体外抑制率分别是61.5%,69.3%和62.4%.选取PreS1抗原基因起始区段的硫代反义寡核苷酸进行大量合成,经Sephadex G-25柱纯化后用于整体动物实验.每只动物每天按10 μ g/g体重静脉注射一次,共给药6天.对动物肝脏进行取样分析表明,在此剂量下,对DHBV DNA的抑制率可达87.9%.由于目前蛋白酶抑制剂被证明是抗HIV的较为有效的药物.通过将p 100w表达载体转化入E.coli细菌细胞,在IPTG作用下,使其表达出包涵体形式的HIV蛋白酶融合蛋白,进一步用尿素分离,Cellulose-Cm柱子色谱纯化,制备出自剪切后之成熟的HIV-1蛋白酶.建立、比较两种测定酶活性(HPLC酶切分析法及荧光底物法)方法,并对酶反应体系进行优化.通过测定Km值及已知HIV PR抑制药的IC<,50>对酶进行鉴定.应用荧光方法建立高通量筛选模型,并顺利进行了7000个微生物产物及其它样品的筛选.使研究者可以高效、快速、灵敏、大量的筛选抗HIV PR样品.
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