1.放射性示踪法研究稀土离子与小鼠红细胞的作用;2.加速器质谱法研究环境水平丙烯酰胺与生物大分子在小鼠体内的加合作用

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目前研究稀土离子(RE3+)及其化合物是否能够跨膜进入细胞的通行方法是,将接触过RE的细胞破膜后分离胞浆,测定胞浆中RE的含量。但是这种方法的缺点是,在分离细胞膜和胞浆的过程中,RE3+可能会发生从膜到胞浆的转移,造成RE3+跨膜进入细胞的假象。为了进一步证实RE3+能否跨膜进入细胞,我们采用高灵敏的放射性示踪法,以169Yb3+与小鼠红细胞作为跨膜运输模型,研究破膜时间对胞浆内RE3+的影响。实验结果表明,破膜后RE3+发生了从细胞膜到胞浆的转移,打破细胞膜后提取胞浆来研究RE3+的跨膜运输,胞浆内有RE3+并不能说明RE3+能跨膜运输;胞浆内少量的RE3+提示在温浴过程中没有发生跨膜运输;进一步研究表明,膜上的RE3+,都是结合在非脂类物质上,而膜脂里没有或没有检测到RE3+存在。采用放射性示踪法的优点在于可以方便的测定外源性环境水平RE3+的影响,而不用考虑内源性RE3+的影响。 丙烯酰胺(AA)具有广泛的应用以及确定的生物毒性,同时由于其广泛存在于各种饮食中,人类一直处于它的潜在威胁中;因此自从2002年以来,WHO强烈呼吁科学家抓紧研究AA的毒性作用以及其潜在的致癌性。本文利用超灵敏的加速器质谱法研究了环境剂量的[2,3-14C]AA与生物大分子的加合作用;目的是在人类接触的剂量下,研究AA潜在的分子毒性,特别是对于精子的毒性作用。研究发现加合物水平与剂量之间存在log/log线性相关性。而且,AA-精蛋白、AA-精子DNA、AA-精头以及AA-精尾加合物水平与AA-血红蛋白(Hb)或者AA-白蛋白(SA)加合物水平之间也呈现一种log/log线性相关性。在精子中,AA主要与精蛋白形成加合物;同时,精头和精尾中的加合水平相当,因此均可能影响精子的质量。在实验误差范围内,我们可以由高剂量范围内的精头的加合数来外推得到低剂量下的精头的加合数;也可以从低剂量的加合,推测其逐渐积累的情况。 AA与生物大分子的加合很可能导致生殖毒性、基因毒性和潜在的致癌性。茶多酚(TP)、白梨芦醇(RESV)、二烯丙基三硫(DATS)和香豆素(COUM)以及1-氨基苯并三唑(ABT)和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC),对多种环境毒物都具有抑制作用。本文采用加速器质谱法研究了这些饮食中存在的成份对环境剂量的AA与生物大分子加合的抑制作用,并对其作用机制进行了讨论。结果表明,TP、DATS、RESV和COUM都能在一定程度上抑制AA与生物大分子的加合作用;TP对AA与精蛋白以及肝蛋白加合物的抑制效果最为显著,抑制率分别为18﹪和10﹪;而RESV对AA-肝脏DNA的抑制效果最为显著,抑制率可达40﹪;同时,对AA-Hb抑制作用最显著的是DATS(38﹪)。也就是说,这些饮食成份可以抑制AA与生物大分子加合物的形成,因此可以在一定程度上阻断AA引起的生殖毒性和基因毒性,同时也预示它们有可能对AA潜在的致癌性有一定的阻碍作用。
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