养正消积胶囊对CaEs-17细胞成瘤组织VEGF、Caspase-3、Bcl-2、PARP的影响

来源 :浙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:suyihui
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目的观察养正消积胶囊对肿瘤组织及肿瘤相关基因VEGF、Bcl-2、caspase-3、PARP的影响,为进一步阐明养正消积胶囊抗肿瘤作用的分子机制奠定基础。方法1、无菌培养CaEs-17细胞,取对数生长期细胞接种于裸鼠右腋皮下,建立移植瘤模型。将53只裸鼠随机分为6组:正常组、模型组、顺铂组(0.06mg/qod)、养正消积胶囊低剂量组(0.02g/d)、养正消积胶囊中剂量组(0.04g/d)、养正消积胶囊高剂量组(0.08g/d)。定期测量并记录各组裸鼠的体重与肿瘤体积变化。第33天处死全部裸鼠,剥取肿瘤组织,计算肿瘤抑制率,并总结养正消积胶囊在肿瘤抑制率上是否存在量效关系。取血比较各组裸鼠的白细胞水平。2、剥取各组肿瘤组织,用TrizoL液裂解细胞,收集悬液,用实时定量PCR (qPCR)检测VEGF、Bcl-2、caspase-3、PARP表达量。在凋亡相关基因表达水平上,总结养正消积胶囊是否存在量效关系。3、用TUNEL法检测人食管癌CaEs-17细胞裸鼠移植瘤的凋亡。结果1、养正消积胶囊与顺铂都可以抑制肿瘤体积的增长,以顺铂组表现最明显,其次为养正消积胶囊低剂量组。顺铂组明显减轻裸鼠体重,其他组体重均有不同程度的上升。顺铂组1只裸鼠死于进食困难。各组肿瘤抑制率分别为:顺铂组(50.76%),养正消积胶囊低剂量组(40.39%),养正消积胶囊中剂量组(26.78%),养正消积胶囊高剂量组(24.83%)。白细胞检测结果显示:与模型组相比,顺铂具有明显提升中性粒细胞数量(p<0.05),显著降低淋巴细胞数量的作用(p<0.05),但对单核细胞及白细胞数量无明显影响;低剂量养正消积胶囊则具有提升白细胞数量(p<0.05),提升单核细胞数量(p<0.01)的作用,但对淋巴细胞及白细胞数量无明显影响。与顺铂相比,养正消积胶囊低、中、高三种剂量均有提升淋巴细胞数量(p<0.01)降低中性细胞数量(p<0.01)的作用。在肿瘤抑制率上,养正消积胶囊未表现出剂量与疗效相关性。2、qPCR检测结果表明,与模型组相比,顺铂与养正消积胶囊低、中、高三组均明显下调了VEGF和Bcl-2的表达(p<0.01),上调了caspase-3的表达(p<0.01);与模型组相比,仅低剂量养正消积胶囊上调了PARP表达(p<0.01),高剂量养正消积胶囊则下调了PARP的表达(p<0.01)。在凋亡相关基因表达水平上,养正消积胶囊也未表现出剂量与疗效相关性。3、选用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(terminal-deoxynucletidy transferase mediated dUTP nick end labling, TUNEL)方法,检测肿瘤组织的细胞凋亡。采用凋亡指数分析凋亡细胞百分比。结果发现,模型组仅有少许细胞核深染为棕褐色的凋亡细胞。各给药组凋亡细胞数均高于模型组。给药组凋亡指数与模型组相比有显著性差异(p<0.01)。顺铂与低剂量养正消积胶囊的凋亡指数最高,但两者无显著性差异。结论1、养正消积胶囊具有抗肿瘤作用,但对CaEs-17细胞肿瘤抑制能力偏低。养正消积胶囊在肿瘤抑制率上未表现出对肿瘤增殖的剂量-疗效相关性。2、养正消积胶囊通过下调VEGF和Bcl-2基因,上调caspase-3和PARP基因具有促进CaEs-17细胞凋亡的作用。在基因表达上,养正消积胶囊未表现出剂量-疗效相关性。
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