论文部分内容阅读
第一部分miR-21、MMP-2和MMP-9在脓毒症患者血浆中的表达水平及相关性分析目的:探讨微小RNA-21(micro RNA-21,miR-21)、基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9在脓毒症患者血浆中的表达水平及相关性分析,为探索脓毒症诊疗新靶点提供理论和实验依据。方法:通过在GEO数据库中检索脓毒症相关数据集,根据是否有统计学意义(P<0.05)及差异倍数(>2),分析筛选差异表达mi RNA。选取脓毒症患者(脓毒症组)及健康志愿者(健康对照组)各40例作为研究对象,采用实时荧光定量PCR法和ELISA法检测miR-21和MMP-2、MMP-9在脓毒症组与健康对照组中的表达水平,并运用Pearson分析脓毒症患者血浆中miR-21和MMP-2、MMP-9的相关性。结果:最终入选的数据集为GSE94717,符合条件的差异表达mi RNA为miR-21(P<0.05)。脓毒症组患者血浆miR-21、MMP-2和MMP-9表达水平较健康对照组升高,且两者呈正相关(r=0.464,P<0.05;r=0.538,P<0.05)。结论:脓毒症患者血浆中miR-21与MMP-2、MMP-9蛋白高表达,且呈正相关,可能存在调控关系。第二部分miR-21对脂多糖诱导下RAW264.7细胞MMP-2和MMP-9表达的调控及机制目的:探讨miR-21对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激下RAW264.7细胞中MMP-2和MMP-9表达的调控及机制,进一步研究miR-21在脓毒症中的作用及机制。方法:对RAW264.7细胞给予10mg/ml LPS刺激,24h后采用实时荧光定量PCR法和ELISA法检测miR-21和MMP-2、MMP-9在LPS组与对照组中的表达水平,并运用Pearson分析miR-21和MMP-2、MMP-9的相关性。构建外源性miR-21干扰的LPS刺激下RAW264.7细胞模型,采用Western blot检测miR-21对MMP-2、MMP-9和TIMP-3蛋白表达影响。结果:LPS组miR-21、MMP-2和MMP-9表达水平较对照组上升,两者呈正相关(P<0.05)。通过miR-21模拟物(miR-21 mimic)外源性上调miR-21表达,MMP-2、MMP-9表达升高,TIMP-3表达降低(P<0.05);通过miR-21抑制剂(miR-21 inhibitor)抑制miR-21表达,MMP-2、MMP-9表达降低,TIMP-3表达升高(P<0.05)。结论:miR-21能促进RAW264.7细胞MMP-2和MMP-9表达,其机制可能与靶向抑制TIMP-3有关。