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脑性瘫痪(Cerebral palsy CP)是指由于发育中胎儿和婴儿脑的非进行性损伤所致持续性运动和姿势发育异常、活动受限的一组综合征[1]。是最常见的儿童致残性疾病之一[2]。据流行病学报道,脑瘫患儿发病率约为2.1‰[3]。患儿多伴有多种运动障碍相关的情况,以及感知、认知、沟通、和行为方面的障碍,这些多个障碍共存情况会对孩子以后的生长发育及最后融入社会造成严重影响[4]。认清、理解这些障碍的原因、其相互之间的关系及这些障碍对运动障碍的影响对于脑瘫的治疗和康复计划的实施,至关重要。痉挛型脑瘫肌肉的痉挛是导致的周围神经和肌肉损伤的重要原因[5],痉挛状态[6]的特点是不随意肌的激活,增加在被动拉伸肌肉的抵抗力,引起关节被动运动困难。临床上公认被动活动的抵抗力增加于脑瘫患儿自主运动障碍关系紧密。肌肉痉挛引起脑性瘫痪的活动受限、周围神经和骨骼肌病变的干预治疗,目前还没有相关研究。Ross and Engsberg[7]解释的是粗大运动的发育而不是痉挛对活动受限的影响。这是与其他两个报告[8-9]一致的,上肢肌肉力量差的因素与CP痉挛状态比较对于儿童/青少年精细运动功能影响更大。痉挛型脑瘫障碍肢体被动运动的阻力感觉是由于被动和主动肌肌张力的变化引起的[10]。这使研究痉挛肌肉的活动以及拮抗被动活动的被动肌肉结构变化具有了很强的挑战性和很重要意义。深入研究这个问题是对于进行这些障碍在CP患儿的康复管理至关重要的,因为肉毒杆菌毒素和重负荷的功能力量训练这些经常使用的康复措施,增强肌肉力量同时可能起到肌张力的进一步增高。持续痉挛状态是脑性瘫痪初级神经肌肉损伤的原因[11],目前仍未研究出肌肉迟缓和肌肉痉挛是脑瘫神经肌肉障碍的主要原因。本研究以痉挛型脑性瘫痪大鼠作为研究对象,对其周围神经和骨骼肌微观结构的病理改变进行电镜观察,结合对大鼠运动功能的评估,旨在揭示头皮位点药物注射对痉挛型脑性瘫痪继发的骨骼肌、周围神经的病理改变的治疗作用,通过查阅文献,国内外关于对脑瘫大鼠周围神经和骨骼肌病变的电镜观察未有涉及。目的本实验以缺血缺氧引起的痉挛型脑性瘫痪的大鼠模型作为研究对象,以头皮位点药物注射为主要干预措施,通过电镜观察实验动物的周围神经、骨骼肌的病理改变程度结合对其运动功能评定来研究头皮位点药物注射对痉挛型脑性瘫痪的治疗作用,以期为临床治疗提供依据。方法1.通过对200只7d龄SD大鼠幼鼠进行双侧颈总动脉分离,左侧颈总动脉结扎、右侧颈总动脉用动脉夹夹闭3h,取下动脉夹后,放入充满含N2:O2体积分数比为为92:8的氮氧混合气体的自制缺氧箱中缺氧2.5h,取出,一周后观察筛选出制作成功的痉挛型脑瘫大鼠模型45只。2.将符合痉挛型脑瘫条件的大鼠随机平均分成3组,每组15只,另随机选15只大鼠仅作双侧颈总动脉分离而不做其他处理作为空白组。依次标注为空白组、对照组、位点生理盐注射水组、位点维生素B1B12注射组;模型建立第14天,位点维生素B1B12注射组于动物额顶叶头皮下注射维生素B1B12注射溶液约2ml,隔天一次,共7次,位点生理盐水注射组给予等量生理盐水注射,注射方法和频率相同。四组均给予一定的环境刺激。3.治疗2周结束后对各组大鼠的一般情况,旷野实验,斜坡实验,平衡木实验和测量步距长进行评估,评估结束后解剖取得比目鱼肌、胫神经制作电镜切片,电镜观察肌肉、周围神经髓鞘形态,对比得出病变的程度。结果1.运动功能评估:(见表1)旷野实验第一分钟内穿过的方格数比较,位点维生素B1 B12注射组(12.47±0.48)多于对照组(6.41±0.30),差异有统计学意义(p=0,F=34.37)、斜扳试验所用时间比较,位点维生素B1B12注射组(1.58±0.07)少于对照组(3.465±0.09),差异有统计学意义(p=0.001,F=9.38)、平衡木实验后肢滑脱次数比较,位点维生素B1B12注射组(0.59±0.23)少于对照组(4.41±0.34),差异有统计学意义(p=0.007,F=7.55)、步距长比较,位点维生素B1 B12注射组(7.62±0.28)大于对照组(4.15±0.27),差异有统计学意义(p<0.014,F=16.35)。2.电子显微镜观察周围神经髓鞘结构及施旺细胞胞体结构改变的结果(见图1、图2):位点注射维生素B1B12组髓鞘形状规则,板层排列致密无松解断裂;施旺细胞结构完整,线粒体、内质网无溶解。对照组髓鞘增生,形状不规则,板层松解、分层、有断裂,分层处可见泡状结构,大小不一。施旺细胞内可见大小不等的空泡状结构,线粒体大部分嵴和部分膜溶解,模糊不清,嵴有断裂、缺失,粗面内质网上附着的核糖体数量减少。3.电子显微镜观察周围神经髓鞘结构及施旺细胞胞体结构改变的结果(见图3、图4):位点注射维生素B1B12组肌细胞结构完整,排列规则,肌细胞核两段及肌膜下有大量线粒体和糖原富集。对照组肌肉纤维有溶解,肌纤维内线粒体溶解,形成大小不等的空泡状结构,部分线粒体髓样化、致密化,线粒体和糖原数量减少明显。结论1.头皮位点药物注射治疗方法可以减轻痉挛型脑瘫大鼠周围神经的病变。2.头皮位点药物注射治疗方法可以改善痉挛型脑瘫大鼠骨骼肌的病变。3.头皮位点药物注射治疗方法可以促进痉挛型脑瘫大鼠运动功能发育。