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背景:肺高血压(pulmonary hypertension,PH)是一种以肺血管重塑为特征的严重致死性疾病,引起肺动脉压持续升高,导致右心室衰竭和死亡。尽管目前临床上肺高血压的靶向药物治疗取得了巨大的进步,但由于其仅致力于舒张血管,并未能逆转PH,且在应用上存在副作用多及价格昂贵等缺点,所以研究改善肺血管重塑途径的新疗法,发现新型靶向药物是势在必行的。在各类肺高血压中,呼吸系统疾病和低氧所致的第三类PH的发病率正在逐年上升,最新的流行病学数据显示我国COPD总人群发病率为8.6%,其中30%到70%的COPD患者合并有PH;在阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者中,肺高血压患病率可达17%~42%。此类患者一旦出现肺高血压则意味着病死率高,预后极差。在缺氧条件下,可以激活自噬以支持细胞存活。微管相关蛋白轻链3(LC3)被用作诱导自噬的标记物。但在PH的发展过程中,自噬作用是适应性的还是非适应性的,仍是一个尚未解决的问题。同时体外研究表明自噬在巨噬细胞极化过程中也起着关键作用。研究表明低氧性肺高血压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)的形成与持续性炎症有关,主要以巨噬细胞为主。巨噬细胞的标记物包括CD68,CD80等,当巨噬细胞出现极化时,M2亚型的细胞的标记物就变成了CD163。体内天然激素雌二醇(E2)被认为是起主要生理作用的雌激素。近年来,雌激素在肺高血压中起保护作用的资料日趋增多,其抗炎作用可以改善肺血管重塑和舒张血管,但其机制尚未完全阐明。目的:1.以去势大鼠HPH为模型,探究雌激素对去势HPH大鼠体内自噬及巨噬细胞极化的影响;2.通过1例西地那非治疗门脉性肺高血压(Portopulmonary hypertension,POPH)的病例来探讨临床上各类靶向药物的安全性及疗效以及进一步探究雌激素在其中的作用。方法:第一部分:1.动物分组:将24只雌性SD大鼠去势后,随机平均分为4组,即去势+常氧组、去势+常氧+E2组、去势+低氧组、去势+低氧+E2组,每组6只。两个E2干预组大鼠每日皮下注射E2 20μg/kg,余组大鼠注射等量生理盐水。两个低氧组大鼠置于氧气浓度为(10.0±0.5)%的低氧环境动物试验箱中,以钠石灰和无水氯化钙吸收多余的CO2和水分,控制CO2浓度<0.5%,每天持续低氧24h;两个常氧组除置于正常空气中饲养外,余饲养条件同低氧组。2.观察大鼠一般状况变化,造模8周后称重,以右心导管测量法测出大鼠肺动脉压力值,继而算出平均肺动脉压(mean pulmonary artery pressure,m PAP),以称量法测出左右心室及室间隔重量,计算出右室肥厚指数(right ventricule hypertrophy index,RVHI),以HE染色对肺小动脉重塑(hypoxic pulmonary artery remodeling,HPSR)观察取材后,HE染色法观察大鼠肺小动脉病理学改变。3.应用RT-PCR测定肺组织中LC3、CD68、CD163 m RNA水平。4.应用Western blot和免疫荧光法测定肺组织中LC3、CD68、CD163蛋白水平变化。第二部分:通过分析河北医科大学第二医院呼吸内二科收治的1例西地那非治疗Caroli病伴门脉性肺高血压患者的诊治经过,参考相关文献,探讨目前临床上各类靶向药物的安全性及疗效以及进一步探究雌激素在其中的作用。结果:第一部分:1.大鼠的一般状况低氧条件下饲养的大鼠逐渐出现进现活动量及进食减少、反应迟钝、毛色晦暗、呼吸加快,且体重下降,有统计学差异(P<0.05),低氧8周过程中未出现死亡。2.大鼠血流动力学(m PAP)、肺小血管及右心室形态学变化与去势+常氧组、去势+常氧+E2相比,去势+低氧组、去势+低氧+E2组肺动脉血管重塑,出现管壁增厚、管腔狭窄,且周围炎性细胞浸润明显,mPAP、RVHI、WT%、WA%均升高(P均﹤0.05);且去势+低氧+E2组较去势低氧组上述指标均降低(P﹤0.05)。3.大鼠肺组织LC3、CD68、CD163 m RNA表达水平的变化:应用RT-PCR测定LC3 m RNA表达水平在去势低氧组高于去势常氧组(P<0.05),且去势低氧+E2干预组亦升高,升高幅度高于去势低氧组(均P<0.05),去势常氧+E2干预组无明显变化(P>0.05)。CD68表达水平在去势低氧组和去势低氧+E2干预组显著高于去势常氧组(P<0.05),常氧+E2干预组无明显变化(P>0.05)。CD163 m RNA表达水平在去势低氧组显著高于去势常氧组(P<0.05),且去势低氧+E2干预组亦升高(P<0.05),升高幅度高于去势低氧组(P<0.05),去势常氧+E2干预组无明显变化(P>0.05)。4.大鼠肺组织中LC3、CD68、CD163蛋白水平的变化:4.1 Western blot结果:LC3(LC3Ⅱ/Ⅰ)蛋白表达水平在去势低氧组高于去势常氧组(P<0.05),且去势低氧+E2干预组亦升高,升高幅度高于去势低氧组(均P<0.05)。CD68蛋白表达水平在去势低氧组和去势低氧+E2干预组显著高于去势常氧组(均P<0.05),常氧+E2干预组无明显变化(P>0.05)。CD163蛋白表达水平在去势低氧组显著高于去势常氧组(P<0.05),且去势低氧+E2干预组亦升高(P<0.05),升高幅度高于去势低氧组(P<0.05),去势常氧+E2干预组无明显变化(P>0.05)。4.2免疫荧光结果:4.2.1 CD68蛋白表达水平在去势低氧组和去势低氧+E2干预组显著高于去势常氧组(均P<0.05),常氧+E2干预组无明显变化(P>0.05)。分析CD68阳性组中LC3的变化,可见LC3的表达水平在去势低氧组高于去势常氧组(P<0.05),且去势低氧+E2干预组亦升高,升高幅度高于去势低氧组(均P<0.05)。4.2.2 CD163蛋白表达水平在去势低氧组显著高于去势常氧组(P<0.05),且去势低氧+E2干预组亦升高,升高幅度高于去势低氧组(均P<0.05),去势常氧+E2干预组无明显变化(P>0.05)。分析CD163阳性组中LC3的变化,可见LC3的表达水平在去势低氧组高于去势常氧组(P<0.05),且去势低氧+E2干预组亦升高,升高幅度高于去势低氧组及趋势常氧+E2干预组(均P<0.05)。第二部分:患者诊断为门脉性肺高血压后,应用西地那非治疗,虽然肺动脉压力未见明显减低,但是临床症状和功能状态相对稳定,治疗过程中未见不良反应;雌激素水平的下降有可能使肺动脉压力升高,但仍待进一步研究。结论:1.E2可能通过上调低氧性肺高血压大鼠肺组织自噬的表达,引起巨噬细胞向M2型极化,进而缓解肺高血压。2.相比于其他药物,西地那非为肺血管选择性活化作用、无肝脏毒性的口服药物,且价格相对便宜、副作用少,但是其在临床上的应用及长期应用对患者血流动力学的影响仍需较多的数据支持。3.雌激素水平的下降有可能加重肺高血压,但仍待进一步研究。