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背景:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着女性的生命健康。化疗是治疗乳腺癌的重要手段,乳腺癌新辅助化疗已被广泛应用于临床,但多耐药的的产生又是导致化疗失败的关键因素。近年来,越来越多的实验证实miRNA与肿瘤的发生发展和化疗耐药密切相关。MiRNAs能够通过碱基互补配对的方式阻碍或降解靶mRNA从而抑制药物诱导的凋亡基因或信号传导通路基因,导致耐药。MiRNA-1268b是一种在任何肿瘤中尚未深入研究且功能机制不清楚的miRNA分子。本研究揭示了miR-1268b对乳腺癌发生发展以及化疗耐药的调节机制。方法:首先从乳腺癌耐药相关的miRNA组织芯片中选取了具有表达差异的miR-1268b。随后收集乳腺癌穿刺组织样本及同病例化疗后手术切除组织样本,并根据化疗敏感性分为敏感组和耐药组,通过查阅及电话随访完善各病例的临床资料。用试剂盒从组织标本中提取总miRNA,逆转录,实时荧光定量PCR检测每例组织样本中miR-1268b的表达量,并根据结果进行临床资料分析,从而进一步确定miR-1268b为研究对象。在乳腺癌两种细胞系中瞬时转染促进miRNA过表达和抑制其表达的miRNA mimics和inhibitor,并用CCK8和EdU实验检测miR-1268b对乳腺癌增殖能力的影响。用Transwell实验检测miR-1268b对乳腺癌细胞迁移和浸润能力的影响。用流式细胞学技术检测miR-1268b对乳腺癌细胞凋亡能力的影响。用miRWalk2.0综合十种软件预测miR-1268b的靶基因,并构建与靶基因结合位点的3’UTR质粒,用双荧光素酶实验、Western blot和细胞免疫组化进行验证。通过软件预测和通路数据库查询,确定经典经典下游通路PI3K-Akt进一步研究,实时荧光定量PCR及Western blot验证miR-1268b与该通路中的分子及凋亡相关蛋白的关系。结果:实时荧光定量PCR检测及临床病理参数分析:RT-qPCR及临床资料分析结果显示,miR-1268b在化疗敏感组织中高表达,并且与肿瘤分期有关。并且随着肿瘤分期的增加,miR-1268b的表达量降低。随后验证了 miR-1268b在乳腺癌7中细胞系中的表达,其中miR-1268b在ERBB2阳性细胞中低表达。在亲本细胞MCF-7中较耐阿霉素乳腺癌细胞MCF-7/ADM的表达显著上调。同时,在低侵袭力的乳腺癌细胞中,miR-1268b的表达相比于高侵袭力的乳腺癌细胞明显增加。体外细胞功能学实验:增殖实验EdU和CCK8、迁移浸润实验证明在乳腺癌两种细胞系中上调或下调miR-1268b的表达,细胞增殖能力和迁移浸润能力均未发生明显变化。凋亡实验中,分别在乳腺癌两种细胞系中上调miR-1268b的表达量可以促进乳腺癌细胞凋亡,下调miR-1268b可以抑制乳腺癌细胞的凋亡,提示miR-1268b与乳腺癌细胞的凋亡能力呈正相关。在一定药物浓度梯度中,上调miR-1268b的表达可以抑制细胞的活力,下调可以促进细胞活力,提示miR-1268b可以抑制乳腺癌细胞的耐药性。靶基因预测和验证:用miRWalk2.0综合十种软件分别预测miR-1268b的靶基因,并通过查文献及双荧光素酶实验检测,证实miR-1268b可与ERBB2的3’-UTR区结合。Western blot和细胞免疫组化实验进一步证明,在miR-1268b过表达的细胞中相较于对照组,ERBB2和AKT2的表达量明显降低,提示ERBB2为miR-1268b的直接靶基因。通路预测和验证:通过软件预测和通路数据库查询,确定经典经典下游通路ERBB2-PI3K-AKT进一步研究,实时荧光定量PCR及western blot验证miR-1268b可以显著下调该通路中的分子ERBB2、PIK3CA、AKT,同时可以下调与凋亡相关的蛋白Bcl2。结论:MiR-1268b可以通过下调ERBB2-PI3K-Akt通路抑制乳腺癌化疗耐药,另一方面也可以通过下调Bc12的表达促进凋亡,从而抑制乳腺癌化疗耐药。