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2型糖尿病是多种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的一系列代谢紊乱综合征。世界卫生组织指出,世界范围内的糖尿病形势仍然非常严峻,而发展中国家的形势尤其令人担忧。番石榴叶作为民间用药用来预防和治疗糖尿病已有悠久的历史,国内外许多学者对其降糖效果展开了大量的研究。但到目前为止,番石榴叶中降血糖活性成分和作用机制尚未得到确切证实。本文以番石榴叶为研究对象,通过建立细胞检测模型,运用系统性的活性追踪方法,对其降血糖活性成分进行分离、纯化、纯度鉴定、活性影响因素、降血糖机制等进行了较为系统的研究。
主要研究结果如下:
(1)番石榴叶提取物降血糖活性检测与效果评价:根据国外文献,建立大鼠附睾脂肪细胞的抗糖尿病活性检测模型,通过胰岛素药效情况评价细胞活性检测模型的可行性,并检测番石榴叶各粗提物组分的降血糖效果。结果表明,胰岛素浓度与细胞摄取葡萄糖量具有正相关效应,说明以该细胞模型作为检测手段具有可行性;番石榴叶50%乙醇提取物组分(50AE),在同等级提取物中,具有最优的降血糖效果,促进脂肪细胞摄取葡萄糖。此外,活性提取物的降血糖效果呈现剂量依赖关系和极性依赖关系。
(2)番石榴叶提取物降血糖活性的影响因素:活性提取物经不同温度,不同pH和不同光照处理后,采用脂肪细胞检测模型,对各样品降血糖活性检测;并研究一年十二个月的番石榴叶50%乙醇提取物的活性比较。结果表明,粗提物50AE经不同温度和不同时间加热处理后,降血糖活性较稳定;不同pH处理后,降血糖活性随着pH的增高活性减弱,但影响效果不强;不同光照处理后,随着光照时间越长,光源种类越复杂,降血糖活性越强;9月份番石榴叶降血糖活性最强,1-5月份样品的降血糖效果逐渐增强,6-9月份的样品活性变化幅度较少,10-12月份的逐渐减弱,其中以1月份的活性最差。
(3)番石榴叶降血糖活性成分的分离纯化:在活性追踪下,对50AE组分采用系统溶剂萃取法进行提取分离,并用粒径不同的聚酰胺对活性萃取组分进行两次柱层析,获得的活性物质使用核磁共振技术进行结构检测。结果表明,经纯化结晶后获得两个具有显著降血糖活性化合物SG1和SG2;经核磁共振分析,SG1为槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖苷,俗称番石榴苷;SG2为槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷,俗称广寄生苷。
(4)番石榴叶活性成分的降血糖机制:药物干预细胞模型后,用游离脂肪酸试剂盒检测活性组分对细胞游离脂肪酸产生的抑制效果,并通过Western Blot法测定细胞膜上葡萄糖转运蛋白4的含量。结果表明,番石榴苷和广寄生苷对细胞游离脂肪酸的产生具有良好的抑制效果,并且能增加脂肪细胞对葡萄糖的摄取及细胞膜上葡萄糖转运蛋白4含量。