【摘 要】
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克隆动物在生物制药和农业生产上有着广泛的应用前景，尽管体细胞核移植技术已经成功地诞生多种哺乳动物的克隆胚胎和成体，但胚胎死亡率高，出生个体及其胎盘的异常等复杂因素表明
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克隆动物在生物制药和农业生产上有着广泛的应用前景，尽管体细胞核移植技术已经成功地诞生多种哺乳动物的克隆胚胎和成体，但胚胎死亡率高，出生个体及其胎盘的异常等复杂因素表明细胞核的重编程不完全。本研究以异种核移植为模型，探讨了线粒体和端粒酶在重编程过程中的变化。
首先我们研究了亲缘关系远近对种间克隆线粒体命运的影响。分别构建遗传背景较近的(北山羊-山羊)以及较远的(北山羊-兔)种间克隆胚胎，建立胚胎培养系统，优化单胚胎裂解及线粒体基因提取方法，用线粒体种属特异性探针扩增细胞色素B序列并双向测序比较结果表明：北山羊-山羊重构胚中，供体来源的线粒体基因组存在于4细胞前，但在其后的发育过程中被降解，受体山羊的线粒体存在于着床前发育的各个时期；北山羊-兔重构胚中，从1细胞直到囊胚期均显示供体与受体线粒体的异质性。
我们进一步探讨了供体来源的线粒体在卵胞质中的降解机制，设计了两种不同的重构胚模型，所选的供体细胞具有相同的核遗传背景但线粒体成分不同。正常克隆牛(克隆组)及其来源供体牛(非克隆组)的耳部组织分离得到的成纤维细胞分别作为供体细胞进行核移植构建胚胎。体外发育能力在两组重构胚中无显著差异，运用时实荧光定量PCR检测发现：非克隆组供体细胞源的线粒体随胚胎发育的进行而逐渐减少，囊胚期急剧降低；克隆组供体源线粒体直至囊胚期基本维持恒定；两组重构胚卵子来源的线粒体变化模式一致即都表现出囊胚期的急速增高。
端粒酶是一种核糖核蛋白复合体，对于维持端粒长度和胚胎发育正常调控具有重要意义。为了探讨在异种克隆中端粒的重编程模式我们研究了牛-兔重构胚发育过程中端粒酶的变化，以兔-兔重构胚作为同种克隆对照。应用基于荧光转移的TRAP法检测着床前胚胎的端粒酶活性变化，结果显示：异种克隆组桑葚/囊胚的发育率显著低于同种克隆对照组，在同种克隆组端粒酶低活性持续到8/16细胞期，桑葚胚期端粒酶活性显著升高，囊胚期到达最高水平；在异种克隆组端粒酶显著升高发生在囊胚期。我们的结果表明：以兔为受体进行核移植，端粒酶在同种克隆组和异种克隆组遵循不同的重编程模式。
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