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猪繁殖与呼吸综合症和猪圆环病毒病是目前养猪生产危害严重的重要传染病,引起猪的呼吸系统疾病综合症,病原体是猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcinereproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)和猪2型圆环病毒(Porcinecircovirus 2,PCV2),这两种病原体均可引起猪的免疫抑制。目前,PRRSV和PCV2混合感染已成普遍,两者混合感染时由于免疫抑制,触发猪群其他传染病的发生与流行,病死率增高。当前,对PRRS的防制主要是采用综合防治和疫苗免疫接种相结合的方法,而对PCV2的预防尚无有效的手段。PRRSV的E蛋白抗体与病毒中和作用有关,与病毒血症消失也相关。PRRSV的E蛋白可诱导机体强烈的体液免疫反应,M蛋白则可诱导病毒中和抗体,且诱导机体细胞免疫。PCV2 Cap蛋白是病毒的主要结构蛋白,具有良好的免疫原性,是构建重组疫苗的首选免疫诱导相关抗原。为探讨PRRSV E蛋白突变前后对机体的免疫诱导,构建了PRRSV、PCV2基因工程疫苗,本研究采用RT-PCR方法扩增了PRRSV主要保护性抗原基因ORF5、ORF6和PCV2的主要结构蛋白基因ORF2。在对PRRSV ORF5突变的基础上,构建了含有PRRSV ORF5、ORF6、PCV2 ORF2和猪IL18基因的重组核酸疫苗质粒和重组鸡痘病毒。经IFA、RT-PCR等检测结果表明,重组核酸疫苗和重组鸡痘病毒中的目的基因在真核细胞中得到正确表达。小鼠免疫试验结果表明,从免疫后2～3周开始,小鼠血清中开始出现PRRSV和PCV2特异性抗体,加强免疫后抗体水平继续升高,显著高于pIRESneo免疫对照组。细胞免疫检测结果表明,重组核酸疫苗免疫组小鼠CD4~+CD8~+T淋巴细胞亚类的数量及淋巴细胞刺激指数显著高于灭活疫苗免疫组和pIRES免疫组。猪体免疫试验结果证明,构建的重组核酸疫苗均能刺激实验猪产生PRRSV、PCV2特异性抗体和中和抗体,中和抗体效价最高均可达1:16。细胞免疫检测结果表明PRRSV、PCV2特异性T淋巴细胞增殖、CD4~+CD8~+T淋巴细胞比例上升、IFN-γ和IL-2分泌水平显著提高,表明核酸疫苗能够介导较好的Th1类免疫反应。重组核酸疫苗免疫猪的组织器官无病理损伤,可以防止猪体病毒血症的出现。攻毒保护实验证明重组核酸疫苗对实验猪起到明显的免疫保护作用。