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牙周炎是由牙菌斑生物膜等因素引起的牙周组织慢性感染性疾病,可导致牙槽骨吸收,进而引起牙齿脱落,影响咀嚼功能甚至影响生活质量。目前,我们通过牙周基础治疗控制疾病炎症发展,但难以完全有效地恢复已丧失的牙槽骨组织,针对这一临床问题,促进牙周组织再生受到关注,通过植入生长因子、支架材料及种子细胞实现牙槽骨重塑促进牙周组织修复,已成为牙周临床发展的关键。近年研究发现寡核苷酸(ODN)参与细胞免疫和骨改建过程,具有研究意义。前期实验中,免疫抑制型ODN MT01可促进感染状态下的人骨肉瘤细胞MG63细胞成骨向分化。本实验将12条不同的ODN序列刺激培养人牙周膜细胞(hPDLCs),筛选出促进增殖和增强碱性磷酸酶(ALP)活性的ODN,并应用筛选出的ODN刺激健康和感染状态下的hPDLCs,检测细胞周期、细胞凋亡情况和细胞内炎性细胞因子的表达情况进行比较分析。方法:1.体外提取培养hPDLCs;培养牙龈卟啉单胞菌。2.采用MTT法检测12条不同序列ODN刺激下hPDLCs的增殖活性。3.采用磷酸苯二钠微板法检测12条不同序列ODN刺激下hPDLCs中碱性磷酸酶活性。4.采用流式细胞术检测筛选出的特定序列ODN刺激下健康和感染hPDLCs的细胞周期和凋亡情况。5.采用实时定量PCR法检测筛选出的特定序列ODN刺激下健康和感染hPDLCs的炎症相关因子IL-1β,IL-6和TNF-α基因表达情况。结果:与PBS组相比,命名为ODN YW002的特定序列ODN表现为促进hPDLCs细胞增殖活性和细胞内ALP活性;此外,ODN YW002可降低健康和感染状态下hPDLCs的细胞早期和晚期凋亡率,G1期hPDLCs百分比降低,S期hPDLCs百分比升高;同时,ODN YW002抑制了感染状态下hPDLCs细胞内IL-1β,TNF-α及IL-6表达水平。结论:1.筛选出2条特定序列的ODN,分别为ODN YW002和ODN MT01,能够促进hPDLCs增殖并促进成骨向分化。2.ODN YW002和ODN MT01能够使健康和感染状态下hPDLCs缩短G1期并进入S期。3.ODN YW002和ODN MT01能够抑制健康和感染状态下hPDLCs的凋亡。4.ODNYW002能够稳定抑制炎症状态下hPDLCs炎症因子表达。