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消毒剂的使用是当今食品工业保障食品安全的一项重要措施,尤其是含氯消毒剂,由于其广谱、高效、低毒和成本低等特点,是水产养殖场地和水产品加工业中消除食品腐败菌和病原菌的首选消毒剂之一,来自环境和食品的食源性致病菌对消毒剂的耐药性可能对人类健康及食品工业造成重大危害。副溶血性弧菌是水产品中引起细菌性食物中毒的重要食源性致病菌,它们分布广泛、污染率高、危害严重,由该菌引起的食物中毒案例在世界各地均有报道。但该菌对消毒剂的耐药性及其耐药机理在国内外尚未见报道。本文系统研究了副溶血性弧菌对含氯消毒剂的耐药响应情况并对其耐药机理进行了探究: 1、副溶血性弧菌对含氯消毒剂的敏感性实验及耐药菌株的筛选 以6株副溶血性弧菌实验室菌株 NQ-020、NQ-246、NQ-247、NQ-248、NQ-250及NQ-253为受试菌,通过氯胺-T和次氯酸钠两种含氯消毒剂亚致死浓度下连续性诱导,成功的筛选出了对氯胺-T具有耐药性的NQ-020-T、NQ-246-T、NQ-247-T、NQ-248-T、NQ-250-T、NQ-253-T以及对次氯酸钠具有耐药性的NQ-020-Na、NQ-248-Na、NQ-250-Na、NQ-253-Na10株稳定性耐药菌株以及 NQ-246-Na和NQ-247-Na2株不稳定耐受菌株。在TSB、MHB和TSB-PBS三种培养体系中,它们对氯胺-T和次氯酸钠的耐受性均比原始菌株增加了一倍,其最小抑菌浓度值分别从128ppm、128ppm、64ppm上升到256ppm、256ppm以及128ppm。 2、原始、耐药菌株培养特性、菌落特征、生化特性比较研究 将原始、耐药菌株分别接种于胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)、硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂(TCBS)、双层科玛嘉以及科玛嘉培养基中进行培养,观察其培养特性及菌落特征并对其进行生化鉴定分析。结果表明,耐药菌株的培养特性和菌落特征与原始菌株并没有差异,在TSA、TCBS、双层科玛嘉以及科玛嘉培养基中均生长良好,并且都呈现出副溶血性弧菌的典型菌落特征。然而,与原始菌株相比,耐药菌株的生化特性却不尽相同,通过消毒剂的诱导,菌株在组氨酸同化、氨基乙酸芳胺酶、磷酸酶、β-半乳糖苷酸酶、鸟氨酸脱羧酶、β-葡萄糖苷酶、L-苹果酸盐同化、L-乳酸盐同化、赖氨酸脱羧酶、琥珀酸盐产碱、乳酸盐产碱、Y-谷氨酰转移酶等方面发生了变化。 3、原始、耐药菌株生长特性比较研究 本实验比较研究了原始、耐药菌株在不同NaCl浓度(1％、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%)以及不同pH值(pH5.5、pH6、pH6.5、pH7、pH7.5、pH8、pH8.5、pH9)环境条件下的生长特性。研究表明,对于盐度而言,耐药菌株和原始菌株的生长情况并无太大差异,除NQ-250-T和 NQ-246-Na的最适盐度从原始菌株的3%NaCl变为4%NaCl之外,其它耐药菌株的最适盐度与所对应的原始菌株相同。在相同pH下,耐药菌株与它们所对应的的原始菌株的生长情况发生了改变,但其最适pH并未发生变化。 4、副溶血性弧菌对含氯消毒剂耐药机理探究 从超微结构、细胞形态、超氧化物歧化酶(SOD)活性和DNA分型的生理角度探究了副溶血性弧菌对含氯消毒剂的耐药调控机制。结果表明,与原始菌株相比,耐药菌株的细胞形态都表现出了体积由大向小、形态由细长状向短粗状或椭圆状变化的趋势,并且经过含氯消毒剂诱导后,副溶血性弧菌耐药菌株的的SOD活性均有所增加。但20.5kb~1135kb分子量 DNA的脉冲场凝胶电泳(PFGE)图谱中并未出现耐药菌株发生基因突变或超表达现象。